ALH015 全血总RNA提取试剂盒
产品简介
全血总RNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持,本品用于科研目的,本品质量稳定,价位合理,需要全血总RNA提取试剂盒等RNA提取纯化产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括全血总RNA提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:全血总RNA提取试剂盒
英文名称:Total RNA Extraction Kit From Blood
产品货号:ALH015
产品规格:20次|50次
本试剂盒使用红细胞裂解液选择性裂解红细胞,然后独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解白细胞和灭活细胞RNA酶,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜, 再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除, zuì后低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
产品组分:
组份 | 20次 | 50次 |
10X红细胞裂解液RLB | 10ml | 25ml |
裂解液RLT | 25ml | 50ml |
去蛋白液RW1 | 15ml | 25ml |
漂洗液RW | 5ml | 10ml |
RNase-free H2O | 10ml | 10ml |
70%乙醇 | 4ml RNase-free H2O | 9ml RNase-free H2O |
吸附柱和收集管 | 20套 | 50套 |
产品特点:
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.不需要使用有毒的苯酚,氯fǎng等试剂,也不需要乙醇沉淀等步骤。
3.反复优化的红细胞裂解液配方,裂解效果快速完全。
4.快速,简捷,单个样品操作一般可在40分钟内完成。
5.多次柱漂洗确保高纯度,OD260/OD280典型的比值达1.9~2.0,基本无DNA残留,可用于RT-PCR,Northern-blot和各种实验。
储存条件:室温,有效期12个月。
注意事项
1. 次使用前请先在漂洗液RW瓶和70%乙醇瓶中加入量乙醇,加入后请及时打钩标记已加入乙醇,以免多次加入!
2. 所有的离心步骤均在室温完成,使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机,如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
3. 需要自备乙醇, β-巯基乙醇,一次性注射器,研钵。
4. 裂解液RLT 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. 预防RNase 污染,应注意以下几方面:
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌,可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时,塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟,然后用水彻底清洗,再灭菌,即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。(将水加入到干净的玻璃瓶中,加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v),37℃放置过夜,高压灭菌。)
6. 关于DNA 的微量残留:一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留,本公司的RNA提取产品,由于采取了本公司独特的缓冲体系和选择了特殊吸附能力的吸附膜,在大多数RT-PCR 扩增过程中其微量的DNA 残留(一般电泳EB 染色紫外灯下观察不可见)影响不是很大, 如果要进行严格的mRNA 表达量分析如荧光定量PCR,我们建议在进行模板和引物的选择时:
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA 清洁,请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前,直接在吸附柱上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。
7. RNA 纯度及浓度检测:
完整性: RNA 可用普通琼脂糖凝胶电泳(电泳条件:胶浓度1.2%;0.5×TBE 电泳缓冲液;150v,15 分钟)检测完整性。由于细胞中70%-80%的RNA 为rRNA,电泳后UV 下应能看到非常明显的rRNA 条带。动物rRNA 大小分别约为5 kb 和2kb,分别相当于28S 和18S rRNA。动物RNA 样品中zuì大rRNA 亮度应为次大rRNA 亮度的1.5-2.0 倍,否则表示RNA 样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度:OD260/OD280 比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA,OD260/OD280 读数(10mMTris, pH7.5)在1.8-2.1 之间。OD260/OD280 读数受测定所用溶液的pH 值影响。同一个RNA 样品,假定在10mM Tris,pH7.5 溶液中测出的OD260/OD280 读数1.8-2.1 之间,在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间,但这并不表示RNA 不纯。
浓度:取一定量的RNA 提取物,用RNase-free 水稀释n 倍,用RNase-free 水将分光光度计调零,取稀释液进行OD260, OD280 测定,按照以下公式进行RNA浓度的计算:终浓度(ng/μl)= (OD260)×(稀释倍数n)×40
本制品别名:血液RNA提取试剂盒|全血RNA提取试剂盒|血液总RNA提取试剂盒|血液总RNA纯化分离试剂盒
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试剂盒特点:
1.一管式操作,避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.含一步离心式脱蜡试剂,不需要使用有毒的二甲苯,健康环保。
3. 能有效去除基因组DNA的污染,得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
4. 即开即用,客户自己不需要准备额外的试剂。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 30mL |
溶液B | 3mL |
溶液C | 5mL |
溶液D | 15mL |
微量核酸沉淀剂 | 30mL |
RNase-free水 | 10mL |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,4℃保存(溶液C需要-20℃放置),有效期一年。
使用方法:
1. 将5片厚度为6-8μM的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(zuì好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A,在振荡器上以zuì大速度振荡10秒。
2. 加入75μL溶液B,在振荡器上以zuì大速度振荡10秒。
3. 7000×g室温离心2分钟,溶液将形成两个相,其中组织切片位于下相。
4.小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体,一般需要一小时。
6. 加入150μL溶液C,55℃保温过夜。
7. 短暂离心,95℃保温10分钟。
8. 加入0.5mL溶液D,充分震荡半分钟。
9. 加入0.1mL自备氯fǎng,振荡器上充分振荡混均30秒。
10. 13000-5000×g室温离心3~5分钟。
11. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质,避免触及,否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见,可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行,否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂,振荡器上振荡30秒混匀。
13. 13000-15000g室温离心5分钟,离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率,可以将离心时间延长到20或30分钟。
14.小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇,振荡混匀30秒。
16. 13000-15000g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液,注意不要吸弃RNA沉淀。
18. 短暂快速离心,用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要,否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥,否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的电泳检测:
21. RNA产量产率测定:将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL),进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
22. RNA纯度测定:无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关),高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染,但一般不影响RT-PCR等反应。
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