RFT092 2×Long Taq PCR M

北京百奥莱博供应的2×Long Taq PCR M用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要2×Long Taq PCR M等核酸扩增(PCR)产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括2×Long Taq PCR MasterMix在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×Long Taq PCR MasterMix
产品货号：RFT092
产品规格：500μl|5×500μl

本品包含Long Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应的增强剂和优化剂以及稳定剂，浓度为2×。使用时，只需补加实验所需的引物和模板后即可进行PCR反应，可zuì大限度的减少人为误差，具有快速简便、稳定性好等优点。用于短链和长链DNA扩增，特别适合于长片段DNA的扩增。使用该产品得到的PCR扩增产物末端含有一个A碱基，可以直接用于TA克隆。

质量控制：经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余基因组DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法;
1、冰浴中彻底融化2×MasterMix，混匀后Minispin将溶液收集到管底。
2、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系:

	50μl反应体系	终浓度
2×MasterMix	25μl	1×
上游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
下游引物 10μM	1-5μl	0.2-0.8μM
模板	×μl	10pg-1μg
水	补至50μl

3、快甩离心将反应液收集到管底。
4、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
5、PCR仪上执行以下程序：

三步法：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	Tm-5℃*	30 sec
延伸	72℃	1 min/kb
zuì后延伸	72℃	5 min	1

两步法：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	1-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火和延伸	68℃	1 min/kb
zuì后延伸	72℃	5 min	1

注： PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定zuì佳的反应条件(温度、时间等)。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

根据您的关注的2×Long Taq PCR MasterMix，您可能还对以下产品有需求：



名称：2×Taq MasterMix(含染料)
货号：WE0102
规格：1ml|5ml|25ml
  Taq MasterMix是由Taq DNA Polymerase、PCR Buffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。预配好的PCR混合液可根据使用量的多少调节扩增产物的特异性和得率，使操作更加简单快捷，并可zuì大限度地减少人为误差和污染。的MasterMix配方使扩增产物得率高，重复性强，稳定性好。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。主要适用于PCR法扩增DNA、DNA序列测定等实验。

产品组成：

组份	1ml	5ml	25ml
2×Taq MasterMix(With Dye)	1ml	5×1ml	5×5ml
ddH2O	1ml	5×1ml	5×5ml

注意：2×Taq MasterMix含有Taq DNA Polymerase, 3 mM MgCl2 和400μM each dNTP。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：

试剂	50μl反应体系	终浓度
2×Taq MasterMix(With Dye)	25μl	1×
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	2 min
变性	94℃	30 s	25-35 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	2 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。


储存条件：-20℃，避免反复冻融。

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