RFT034 RNA提取试剂

RNA提取试剂的品牌是百奥莱博，是优质的RNA提取纯化产品，本制品仅用于生物化学研究方面，我公司专注于RNA提取纯化产品的研发、生产和供应，为您提供的RNA提取试剂质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括RNA提取试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：RNA提取试剂
英文名称：RNA Extraction Reagent
产品货号：RFT034
产品规格：100ml

本试剂是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，可以提取细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总RNA。提取的总RNA可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保护分析等分子生物学实验。

产品特点：
1 分相明显：本试剂为粉红色，便于lǜ仿分相后区分水相和有机相。
2 结果可靠：该试剂含有强烈抑制RNase活性的物质，可靠保护RNA不降解。
3 价廉物美：其提取效果与国外进口产品相媲美，价格却低于它的三分之一。

自备试剂及耗材：
lǜ仿、异丙醇、75%乙醇(用RNase-free 水配制)、RNase-free的水、RNase-free的耗材(Tip头，离心管等)。

操作步骤：

1、匀浆处理
组织中提取总RNA：
a.植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1ml RNA 提取试剂。
b.动物组织：按10-30mg组织加入1ml RNA 提取试剂，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。
培养细胞中提取总RNA：
a.贴壁细胞：无须胰酶消化，可直接用RNA 提取试剂进行裂解，每10cm2培养面积加1mlRNA 提取试剂。
b.悬浮细胞：可直接离心收集、裂解，每1ml RNA 提取试剂可裂解5×106动物或酵母细胞，或107细菌细胞。
血液中提取总RNA：
直接取新鲜的血液，加入3 倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，9,000 g离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml RNA提取试剂。

2、分层(Phase Separation)
根据样品，选择使用方法A或者方法B。如果不确定，则使用方法 B。
A、(细胞，血液，一般动物组织)
室温静置5 分钟，再按照1 ml RNA 提取试剂使用200μl的比例加入lǜ仿，用力颠倒离心管以混匀；室温静置3 -5 分钟使之分层后，4℃ 12000g 离心15
分钟。
B、(植物，脂肪及肝脏等某些杂质含量较高的样品)
室温静置5 分钟后，4℃条件下12000 g 离心10 分钟，将上清移入另外一个离心管中。再按照1 ml RNA提取试剂使用200μl 的比例加入lǜ仿，用力颠倒离心管以混匀。室温静置2 - 5 分钟使之分层后，4℃条件下12000 g 离心15 分钟。
注意：
·4℃ 离心对于降低基因组DNA 的污染是很重要的。
·杂质含量高的样品一定要使用2-B 操作。2-B 操作不仅可以将大部分杂质离心去除，也可以将大片段的基因组
DNA 离心去除，方便加入lǜ仿后的分层，不过，如果想同时抽提总RNA 和基因组DNA，则使用2-A 操作。
·加入lǜ仿后的混匀是非常重要的，否则静止分相易出现分相倒置，即水相在离心管下部而有机相在上部。不推荐振荡混匀，而推荐直接用手混匀：将管底斜向朝上，手斜向快速摇动，使体系成粉色乳状。

3、RNA沉淀(RNA Precipitation)
小心将上层水相(通常可吸取550μl)移至另外一个离心管中，再加入等体积冰冷的异丙醇混匀，室温放置10 - 20 分钟，4℃12000g 离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。
注意：
·中间层和红色下层置于 4℃ 保存，以便接下去抽提基因组DNA。
·用冰冷的异丙醇能更迅速的沉降RNA。
·取上层水相时要特别小心，不要吸入白色中间层及红色下层。移取水相时要使用小体积移液器：200μl 移液器，Tip 的尖嘴要贴在管壁，慢慢松手吸出液体。
·对于脂肪类组织，包括脑组织，在上清的zuì上层为脂肪，取上清时不要吸入，必要时用等体积lǜ仿对上清再抽提一次。
·如果是杂质含量高的样品，强烈建议将此步操作改为：在上清中加入一半体积的异丙醇，混匀后，再加入一半 (指上清) 体积的RNA 沉淀试剂(1.2M NaCl，0.8M 柠檬酸钠)。再混匀后，室温放置10 – 20 分钟。
·弃上清后，将离心管置于离心机中离心数秒，再用移液器将残留液体小心吸出。这是zuì彻底的去除上清的方法，比倒掉上清后再将离心管倒扣在吸水纸上的方·法可靠得多。如果是杂质含量高的样品，强烈建议增加此步操作。如果肉眼看不见沉淀，则不要用移液器吸。

4、RNA漂洗(RNA Wash)
a.RNA 沉淀中加入1ml 75%乙醇(用RNase-free 水配制)，温和振荡离心管，悬浮沉淀。每1ml RNA提取试剂加入1ml 75％乙醇。
b.4℃ 7,500 g离心5min，弃上清。
注：转速不要高于7,500g，否则得到的RNA不易溶解。
c.短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。室温放置1-2分钟晾干沉淀。
注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

5、溶解RNA(Redissolving the RNA)
根据需要，沉淀中加入适量(一般可加50-100μl)RNase-free 水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

储存条件：2～8℃，避光，有效期12个月。

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名称：石蜡包埋组织RNA提取试剂盒
货号：BTN81102
规格：30次
石蜡包埋组织本是珍贵的分子生物学研究材料，但是由于它们的保存时间一般都比较长，很不容易从中提取到可以进行PCR的RNA，存在的主要问题是RNA的降解和脱蜡过程中样品的丢失。本产品是专门用于从甲醛和非甲醛固定的石蜡包埋组织中快提RNA的试剂

试剂盒特点：
1.一管式操作，避免了可能的交叉污染和样品RNA的丢失。
2.含一步离心式脱蜡试剂，不需要使用有毒的二甲苯，健康环保。
3. 能有效去除基因组DNA的污染，得到的RNA可直接用于RT-PCR反应。
4. 即开即用，客户自己不需要准备额外的试剂。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	30mL
溶液B	3mL
溶液C	5mL
溶液D	15mL
微量核酸沉淀剂	30mL
RNase-free水	10mL
说明书	1份

储存条件：低温运输，4℃保存(溶液C需要-20℃放置)，有效期一年。

使用方法：
1. 将5片厚度为6-8μM的石蜡包埋组织切片转移到1.5mL塑料离心管(zuì好使用螺旋盖离心管)中并加入1mL溶液A，在振荡器上以zuì大速度振荡10秒。
2. 加入75μL溶液B，在振荡器上以zuì大速度振荡10秒。
3. 7000×g室温离心2分钟，溶液将形成两个相，其中组织切片位于下相。
4.小心吸弃上层液体。
5. 将离心管放入真空离心机中抽干下层的液体，一般需要一小时。
6. 加入150μL溶液C，55℃保温过夜。
7. 短暂离心，95℃保温10分钟。
8. 加入0.5mL溶液D，充分震荡半分钟。
9. 加入0.1mL自备lǜ仿，振荡器上充分振荡混均30秒。
10. 13000-5000×g室温离心3～5分钟。
11. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中。下层有机相(蓝色)和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的DNA。
12.在上清液中加入两倍体积的微量核酸沉淀剂，振荡器上振荡30秒混匀。
13. 13000-15000g室温离心5分钟，离心底的侧面将形成RNA沉淀。如果需要提高RNA回收率，可以将离心时间延长到20或30分钟。
14.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
15.在含RNA沉淀的离心管中加入1mL自备的75%乙醇，振荡混匀30秒。
16. 13000-15000g室温离心1分钟。
17.小心吸弃上清液，注意不要吸弃RNA沉淀。
18. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留乙醇(约50μL)。注意不要吸弃沉淀。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
19.室温放1-2分钟后立即加入50-100μL RNA溶解液使RNA沉淀溶解。千万不要用真空离心法使RNA沉淀过于干燥，否则RNA将变得十分难溶。样品立即使用或存放于-80℃待用。
20. RNA完整性的电泳检测：
21. RNA产量产率测定：将5-10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
22. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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