WH0014 病毒DNA/RNA提取试剂盒(离
产品简介
病毒DNA/RNA提取试剂盒(离的品牌是百奥莱博,是优质的DNA提取纯化产品,本制品仅用于生物化学研究方面,我公司专注于DNA提取纯化产品的研发、生产和供应,为您提供的病毒DNA/RNA提取试剂盒(离质量可靠,批间差小,且价格公道,热切盼望您选购我们的产品。...
产品详细介绍
特别提示:包括病毒DNA/RNA提取试剂盒(离心吸附柱法)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:病毒DNA/RNA提取试剂盒(离心吸附柱法)
英文名称:Extraction kit for nucleic acid from virus
产品货号:WH0014
产品规格:50次
本试剂盒采用、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统,适合从血浆、血清和其它无细胞体液等样品中分离纯化病毒的DNA或者RNA,本试剂盒特别加入了Carrier RNA,可以从体系中轻松捕获微量核酸,具有方便快捷、产量高、重复性好的特点。所得病毒基因组DNA或RNA无蛋白、核酸酶或其它杂质的污染,可直接用于PCR、酶切、杂交、反转录等分子生物学实验。本试剂盒操作简单、快速,1h内即可获得高纯度DNA或RNA。用于各种病毒DNA/RNA核酸提取,如HCV、HIV、HPV、动物致病性病毒等。
产品特点:
·快速纯化得到高质量病毒DNA和RNA。
·重复性强,产量高。
·无有机抽提或乙醇沉淀。
·完全去除污染物和抑制剂,方便下游应用。
试剂盒组成:
组分 | 50T |
缓冲液GB | 15ml |
缓冲液GD | 13 ml |
漂洗液PW | 15ml |
RNase-Free ddH2O(瓶装) | 15ml |
Proteinase K | 1 ml |
Carrier RNA | 310μg |
RNase-Free ddH2O(管装) | 1 ml |
RNase-Free吸附柱CR2(含2 ml收集管) | 50套 |
RNase-Free离心管(1.5 ml) | 50个 |
保存条件:室温(15-25℃)干燥条件下,可保存12个月,更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下,若溶液产生沉淀,使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间,必要时可在37℃水浴中预热10min,以溶解沉淀。Carrier RNA配置成储液后置于-20℃。
注意事项:(请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1.所有的离心步骤均在室温下进行(15-25℃)。
2.将样品平衡至室温。
3.试剂盒中提供的RNase-Free离心管(1.5 ml)供第13步洗脱步骤使用,其余离心管需自备。
Carrier RNA溶液的配制如下:
·向装有310μg Carrier RNA冻干粉的管子中加入310μl RNase-Free ddH2O,将Carrier RNA彻底溶解,得到终浓度为1 μg/μl的溶液,并按实验情况分装到RNase-Free的离心管中,置于-20 ℃储存。使用时按照提取的次数取出相应的溶液,该溶液应避免反复冻融,冻融次数不能超过3次。
·注意Carrier RNA冻干粉不能直接溶解于缓冲液GB中,必须先溶解在RNase-Free ddH2O中,再溶解至缓冲液GB中。
· Carrier RNA工作液:根据样品的数量计算所需缓冲液GB和Carrier RNA溶液的体积(见表1或使用以下公式计算),将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀,即得到Carrier RNA工作液;为避免溶液出现起泡现象,请勿使用涡旋振荡。
如果需要提取大量的样品,可根据以下公式计算:
n×0.22 ml =y ml
y ml×28 μl/ml=z μl
n=同时提取的样品个数,y=需要加入缓冲液GB的体积,z=需要加入Carrier RNA溶液的体积。
表1:步骤3中Carrier RNA工作液的配制:
样品个数 | GB(ml) | Carrier RNA水溶液(μl) |
1 | 0.22 | 6.2 |
2 | 0.44 | 12.3 |
3 | 0.66 | 18.5 |
4 | 0.88 | 24.6 |
5 | 1.1 | 30.8 |
6 | 1.32 | 37 |
7 | 1.54 | 43.1 |
8 | 1.76 | 49.3 |
9 | 1.98 | 55.4 |
10 | 2.2 | 61.6 |
11 | 2.42 | 67.8 |
12 | 2.64 | 73.9 |
13 | 2.86 | 80.1 |
14 | 3.08 | 86.3 |
15 | 3.3 | 92.4 |
16 | 3.52 | 98.6 |
17 | 3.74 | 104.7 |
18 | 3.96 | 110.9 |
19 | 4.18 | 117 |
20 | 4.4 | 123.2 |
21 | 4.62 | 129.4 |
22 | 4.84 | 135.5 |
23 | 5.06 | 141.7 |
24 | 5.28 | 147.8 |
注意:请将缓冲液GB与Carrier RNA溶液颠倒混匀,即得到Carrier RNA工作液;为避免溶液出现起泡现象,请勿使用涡旋振荡。
使用方法:
使用前请先在缓冲液GD和漂洗液PW中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶上的标签。
1.用移液器将20 μl Proteinase K加入一个干净的1.5 ml离心管中。
2.向离心管中加入200 μl血浆/血清/淋巴液(样品需平衡至室温)。
注意:如果样本体积小于200 μl,可加入0.9% NaCl溶液补充。
3.加入200 μl Carrier RNA工作液(为缓冲液GB与Carrier RNA溶液的混合液,配制方法如表1或按照公式计算)。盖上管盖,涡旋振荡15 sec混匀。
注意:为了保证裂解充分,样品和Carrier RNA工作液需要彻底混匀。
4.在56℃孵育15 min。简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
5.加入250 μl无水乙醇,此时可能会出现絮状沉淀。盖上管盖并涡旋振荡15 sec,彻底混匀。在室温(15-25℃)放置5 min。
注意:如果周围环境高于25℃,乙醇需要再在冰上预冷后再加入。
6.简短离心以收集附着在管壁及管盖的液体。
7.仔细将离心管中的溶液和絮状沉淀全部转移至RNase-Free吸附柱CR2(吸附柱放在收集管中),盖上管盖,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管中。
注意:如果吸附柱上的液体未能全部离心至收集管中,请加大转速,延长离心时间至液体完全转移到收集管中。
8.小心打开吸附柱盖子,加入500 μl溶液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),盖上管盖,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管。
9.小心打开吸附柱盖子,加入600 μl溶液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),盖上管盖,静置2 min,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液,将吸附柱放回收集管。
10.重复步骤9。
11.小心打开吸附柱盖子,加入500 μl无水乙醇,盖上管盖,8000rpm (~6,000×g)离心1 min,弃废液。
注意:乙醇的残留可能会对后续实验造成影响。
12.将吸附柱放回收集管中,12000rpm (~13400×g)离心3 min,使吸附膜完全变干,弃废液。
13.将吸附柱放入一个RNase-Free离心管(1.5 ml)中,小心打开吸附柱的盖子,室温放置3 min,使吸附膜完全变干。向吸附膜的中间部位悬空滴加20-150 μl RNase-FreeddH2O,盖上盖子,室温放置5 min。12000rpm (~13400×g)离心1 min。
注意:确保洗脱液(RNase-Free ddH2O)在室温平衡后再使用。如果加入洗脱液的体积很小(小于50 μl),为了将膜上的DNA/RNA充分洗脱下来,应注意将洗脱液加到膜的中央位置。洗脱体积可以根据后续的实验要求灵活处理。
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名称:柱式软体动物DNA提取试剂盒
货号:BTN101111
规格:50次
本试剂盒是专门用于从各种软体动物组织中提取基因组DNA的试剂盒。其原理是基于阳离子去垢剂CTAB在适当的离子强度条件下,特异地跟基因组DNA 结合形成沉淀,然后在用硅胶膜技术进行进一步纯化。
产品特点:
1.适用于用常规方法难以提取的、各种富含多糖的软体动物动物,包括螺类、贝类、乌贼、章鱼和蜗牛等。
2. 提取到的基因组DNA 完整性,其中zuì长可以到达长度一般在20-50kb。
3. DNA 纯净,OD260/280一般都在1.9左右、DNA片段大小在30-50 Kb左右,可直接用于PCR、酶切、杂交等。
4. 操作简单,整个过程约30分钟。
5. 安全,本试剂盒对人体,无腐蚀性和刺激性气味。
6. 价廉物美,与国外同类产品相比质量相当,但价格。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A | 50ml |
溶液B | 50ml |
溶液C | 100ml |
RNase A(10mg/mL) | 150μl |
离心吸附柱 | 50套 |
通用洗柱液 | 50ml |
DNA洗脱液2.0 | 10ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
1. 匀浆方法一:称取0.1-0.3g软体动物组织,转移到塑料研钵中,液氮研磨成粉后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意:zuì好避免使用含二氧化硅的玻璃研钵,因为DNA 会吸附在表面,影响得率。在离心管中加入1mL 65℃预热的溶液A并用移液枪头充分吹打混匀(如果溶液A有沉淀,需先在65℃加热溶解后摇匀再使用)。进入第三步。
2. 匀浆方法二:将0.1-0.3g软体动物组织剪成小块,转移到10-15mL塑料管中(培养细菌那种离心管即可),加入1mL 65℃预热的溶液A,用Polytron 式匀浆机(剪切式匀浆机)匀浆1分钟左右。
3. 65℃保温5-30分钟,其间zuì好吹打混匀2-3次。
4.转移到新的1.5mL离心管中,12000~15000g室温离心3分钟。
5. 将不超过0.75mL的上清转移到新离心管中。有时候上清液中还会有少量细小悬浮物,但对后续操作没有影响,不必进行特殊处理。
6.在上清液中加入等体积的溶液B,上下颠倒30秒充分混匀,溶液将呈白色混浊状。
7. 将其置于冰浴中放置5-10分钟。
8. 12000~15000g室温离心3分钟,转移上清到新的1.5mL塑料离心管中。
9. 加入0.2mL的lǜ仿(自备),震荡器上充分振荡30秒混匀。
10. 12000~15000g室温离心3分钟,两相交界面将有白色膜状物,小心转移上清到新1.5-5mL塑料离心管中。注意:由于下一步要加1.5倍体积的溶液C,所以新的离心管的体积要足够大。
11. 加入1.5倍体积的溶液C,上下颠倒30秒混匀,然后分多次的将混合液转移到离心吸附柱中。
12. 每次转移0.7-0.8mL 混合液后,室温放置5-10分钟。
13. 12000~15000g室温1分钟,弃穿透液。
14. 对需要多次上柱的样品,可以在此将剩余的样品加到离心吸附柱式中,重复第12-14 步的操作。
15. 将0.7mL 通用洗柱液加入离心柱,室温离心1分钟,弃穿透液。
16.在离心吸附柱中加入0.3mL的通用洗柱液,12000~15000g离心半分钟(此步为第二次洗涤)。
17. 空甩1分钟去除残留液体。
18. 将离心柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中,加入30-100μL DNA 洗脱液2.0。
19.室温放置5分钟后离心1分钟,管底即为软体动物DNA溶液,可立即使用,也可长期保存在-20℃。
20.可以重复上步一次,以洗脱更多的DNA(第二次洗脱的DNA一般有次的30%左右)。
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