BTN11-3780 鹦鹉热衣原体荧光定量PCR检测试

鹦鹉热衣原体荧光定量PCR检测试由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，我公司的鹦鹉热衣原体荧光定量PCR检测试品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括鹦鹉热衣原体荧光定量PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：鹦鹉热衣原体荧光定量PCR检测试剂盒
英文名称：Chlamydia psittaci qPCR Kit
产品货号：BTN11-3780
产品规格：50次

鹦鹉热衣原体(Chlamydia psittaci, C.psittaci, Cps) 形状呈圆形或椭圆形，直径约0.3μm左右，在细胞空泡中增值，形成疏松包涵体。鹦鹉热衣原体是自然性疫源，可在哺乳动物之间传播。鹦鹉热衣原体和沙眼衣原体(C. trachomatis, Ct)、肺炎衣原体(C.pneumoniae, Cpn)和反刍动物衣原体(C. pecorum, Cpe)是四种zuì常见的衣原体。衣原体可以引起哺乳动物的流产、肺炎、肠炎、脑脊髓炎、多浆膜炎、多关节炎、角膜结膜炎、尿道炎及鸡的输卵管炎等症。早期、快速、简便检测衣原体对诊治、延缓该病的传播和预防并发症显得尤为重要。本产品即是基于荧光定量PCR法的鹦鹉热衣原体快速检测试剂盒。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，操作简单，定量准确快速。
2. 根据Cps主要外膜蛋白(MOMP)基因的保守序列设计引物，引物经过优化，特异性高。预期的PCR产物长度为100bp。
3. 荧光定量PCR检测，所含SYBR Green I只与双链DNA结合，反应特异性强。
4. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
2×qPCR Mix	BTN90408	1mL
Cps专一性引物一	yw1080	200 μL
Cps专一性引物二	yw1081	200 μL
Cps阳性对照 XXX 10E9拷贝/μL	yw10781079	100 μL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期12个月。

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货号	名称	规格
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名称：禽流感病毒H5亚型(AIV-H5)单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA324
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对禽流感病毒H5亚型特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对禽流感病毒H5亚型RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中禽流感病毒H5亚型的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各种组织样品、尿囊液及细胞培养液中的禽流感病毒H5亚型的特异性检测。适用于禽流感病毒H5亚型感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
禽流感H5荧光qRT-PCR反应液(H5-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(H5-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500μL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无RNA酶污染的离心管中，6000rpm离心20s，取上清备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中，8000rpm离心2min，取上清液于1.5mL灭菌离心管中。
6.2 RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
6.2.1 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
6.2.2 加入600μL裂解液，200μL样本，200μL氯fǎng，混匀器上振荡5 s，4℃ 12000 rpm离心15 min。
6.2.3 吸取步骤6.2.2中的上清液转移至新的无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管中(避免吸出中间层)，加入400 μL 异丙醇，颠倒混匀。
6.2.4 4℃ 12000 rpm离心15 min，弃上清；加入600 μL 75％乙醇。
6.2.5 4℃ 12000 rpm离心10 min，弃上清。打开离心管管盖，室温干燥5 min-10 min。
6.2.6 加入10μL 无核酸酶水，溶解管底的RNA，5000 rpm离心5 s，-20℃保存。若长期保存需放置-80℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(H5-qRT-PCRMIX)、酶混合物(EnzymesMIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(H5-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
(1)阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
(2)阳性对照(H5-PTC)：均产生扩增曲线。
(3)以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1)在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明H5核酸阳性。
(2)Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明H5核酸阴性。
(3)如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
(4)对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行H5qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明H5核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项
(1)初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2)所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
(3)PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
(4)样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
(5)试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。



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