SNM412 一步法植物活性蛋白提取试剂盒
产品简介
一步法植物活性蛋白提取试剂盒是高品质的蛋白质研究产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于科学研究,我公司的一步法植物活性蛋白提取试剂盒品质上佳,经过多年的开发生产,已然非常成熟,欢迎广大新老客户订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括一步法植物活性蛋白提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:一步法植物活性蛋白提取试剂盒
英文名称:Plant active protein extraction kit
产品货号:SNM412
产品规格:20T
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名称:Western及IP细胞裂解液
货号:YT038
规格:100ml
本品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞,可以用于PAGE,Western,免疫沉淀(immunol precipitation,IP)和免疫共沉淀(co-IP)。
Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris(pH7.5),150mM NaCl,1% Triton X-100,以及sodium pyrophosphate,β-glycerophosphate,EDTA,Na3VO4,leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解,并维持原有的蛋白间相互作用。
用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品,可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036,YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质,不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。
储存条件:-20℃,有效期一年。
名称:SDS-PAGE浓缩胶缓冲液(4×)
货号:WE0286
规格:200ml
本产品为配制SDS-PAGE浓缩胶缓冲液,可用于配制各种浓度的变性及非变性PAGE凝胶,方便、快捷。产品中已加入10%SDS,使用时不用另外加入。
操作步骤:
根据目的蛋白分子量大小选择合适的PAGE分离胶配制浓度,zuì佳胶浓度请参考附表1。
I 灌制分离胶(各试剂使用量请参考附表2)
1、参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
注:加入上层筛板有助于加样时保持填料与样品均匀接触,是否加入上层筛板可根据实际情况选择。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、分离胶缓冲液和纯水在小烧杯或试管中混合。
3、加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5 cm或距梳齿约0.5 cm即可), 然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1 cm的水层,使凝胶表面保持平整。
5、静置30-60分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,表面凝胶已聚合。
II 灌制浓缩胶(各试剂使用量请参考附表3)
1、去除覆盖在分离胶上的水层。
2、将不同体积的30%Acr-Bis(29:1)、SDS-PAGE Stacking Gel Buffer(4×)浓缩胶缓冲液和纯水在一个小烧杯或试管中混合。
3、加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
4、将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端。
5、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
6、静置10~20分钟,等待浓缩胶聚合。
7、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
8、进行常规电泳操作。
附表1. SDS-PAGE分离胶的浓度与zuì佳分离范围
SDS-PAGE 分离胶浓度 | zuì佳分离范围 |
6%胶 | 50-150 kD |
8%胶 | 30-90 kD |
10%胶 | 20-80 kD |
12%胶 | 12-60 kD |
15%胶 | 10-40 kD |
附表2. 配制SDS-PAGE分离胶
分离胶浓度 | 凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 分离胶缓冲液(4×) | 10%APS | TEMED | ||
6% | 5ml | 2.75 | 1.0 | 1.25 | 0.05 | 0.004 |
10ml | 5.5 | 2.0 | 2.5 | 0.1 | 0.008 | |
15ml | 8.25 | 3.0 | 3.75 | 0.15 | 0.012 | |
20ml | 11 | 4.0 | 5 | 0.2 | 0.016 | |
8% | 5ml | 2.42 | 1.33 | 1.25 | 0.05 | 0.003 |
10ml | 4.8 | 2.7 | 2.5 | 0.1 | 0.006 | |
15ml | 7.25 | 4.0 | 3.75 | 0.15 | 0.009 | |
20ml | 9.7 | 5.3 | 5 | 0.2 | 0.012 | |
10% | 5ml | 2.08 | 1.67 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10ml | 4.17 | 3.33 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15ml | 6.25 | 5.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20ml | 8.3 | 6.7 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
12% | 5ml | 1.75 | 2.0 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10ml | 3.5 | 4.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15ml | 5.25 | 6.0 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20ml | 7.0 | 8.0 | 5 | 0.2 | 0.008 | |
15% | 5ml | 1.25 | 2.5 | 1.25 | 0.05 | 0.002 |
10ml | 2.5 | 5.0 | 2.5 | 0.1 | 0.004 | |
15ml | 3.75 | 7.5 | 3.75 | 0.15 | 0.006 | |
20ml | 5 | 10.0 | 5 | 0.2 | 0.008 |
附表3. 配制5%SDS-PAGE浓缩胶
凝胶体积 | 所需各组分体积(单位:ml) | ||||
纯水 | 30%Acr-Bis(29:1) | 浓缩胶缓冲液(4×) | 10%APS | TEMED | |
2ml | 1.14 | 0.34 | 0.5 | 0.02 | 0.002 |
4ml | 2.28 | 0.68 | 1 | 0.04 | 0.004 |
6ml | 3.42 | 1.02 | 1.5 | 0.06 | 0.006 |
8ml | 4.56 | 1.36 | 2 | 0.08 | 0.008 |
储存条件:2~8℃
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