QN1237 1×TBST缓冲液
产品简介
1×TBST缓冲液由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持,本品用于科研目的,本产品质量好,且具价格,深为用户称道,了解更多1×TBST缓冲液等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括1×TBST缓冲液在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:1×TBST缓冲液
英文名称:TBST,1×
产品货号:QN1237
产品规格:500ml
TBST缓冲液是生物学中常使用的等渗缓冲盐溶液,主要用于 Western Blot 实验中洗去膜上非特异性结合 的抗体等试剂。由 Tris-HCl 构成稳定的 PH 缓冲体系,NaCl 提供等渗条件,Tween-20 作为去污剂可增加缓冲液 的洗脱能力。 本产品为 1×工作液,可直接使用,用后请及时拧紧瓶盖,以防挥发。4℃保存可延长产品保质期,长期不 用建议低温保存。若产品出现结晶析出,请置于 37℃水浴至完全溶解。
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货号 | 名称 | 规格 |
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规格:5g
本产品用于制备脂质体和分离脂质。HPLC测定其纯度>99%。低紫外吸收(1%溶液的A280<0.08)。可以重生固定化的多粘菌素B 亲和柱。
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
名称:蛋白浓度测定试剂盒(Bradford法)
货号:YT034
规格:1000次
本试剂盒是根据zuì常用的两种蛋白浓度检测方法之一Bradford法研制而成,实现了蛋白浓度测定的快速,稳定和高灵敏度。
本试剂盒检测速度快,10-20个样品只需不足10分钟即可完成。灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,zuì小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
Bradford法测定蛋白浓度不受大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20,60,80低于0.015%。含去垢剂的样品推荐使用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT037)。
试剂盒组份:
G250染色液——————————100ml×2
蛋白标准(5mg/ml BSA)—————1ml
储存条件:4℃,有效期9个月。(BSA需-20℃保存)
名称:RIPA裂解液(强)
货号:WE0258
规格:100ml
RIPA裂解液是一种传统的组织以及细胞快速裂解液,主要用于从动物组织和哺乳动物细胞中抽取可溶性蛋白,可用于裂解贴壁细胞和悬浮细胞。按照其裂解液的强度可以分为强、中、弱三类,具体特点和差异请参考附表2,可根据实验需求选择相应产品。RIPA裂解液(强)可以有效提取细胞核、细胞膜和胞浆蛋白,提取的蛋白可应用于蛋白定量、Western Blot、IP等检测分析。
RIPA裂解液(强)的主要成分为50mM Tris(pH 7.4),150mM NaCl,1%Triton X-100,1% sodium deoxycholate,0.1% SDS以及sodium orthovanadate,sodium fluoride,EDTA,leupeptin等。
注意事项:
1、为防止蛋白降解,所有的操作尽量在冰上进行。
2、使用RIPA裂解液得到的蛋白样品,可采用BCA法进行蛋白定量,以测定蛋白浓度。产品可单独向本公司订购,如:WE0276 BCA蛋白定量试剂盒。本品含有高浓度的去垢剂,不能用Bradford法进行蛋白定量。
3、建议在使用RIPA裂解液前,向溶液中加入蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂,以防止蛋白降解,或保持蛋白的磷酸化状态。产品可单独向本公司订购,如:WE0259 蛋白酶抑制剂混合物,WE0256 磷酸酶抑制剂混合物。
4、若需获得更高浓度的蛋白,应减少哺乳动物蛋白抽提试剂的使用量。
5、对于培养瓶中的贴壁细胞,推荐先使用常规方法消化细胞,再参考悬浮细胞蛋白提取步骤操作。
6、对于离心获得的细胞,若不确定细胞体积,可根据细胞数量计算RIPA裂解液的使用量。如5×106个Hela细胞约需加入500μl RIPA裂解液,以此类推。
使用方法:
一、细胞样品
贴壁细胞蛋白抽提
1、小心倾去贴壁细胞的培养液。
2、可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请先使用预冷的PBS漂洗细胞。
3.加入适量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂),试剂使用量请参考附表1,在冰上用枪头吹打贴壁细胞。
表1 贴壁细胞RIPA 裂解液使用量推荐表
细胞培养板类型或培养面积 | RIPA 裂解液使用量 |
100 mm | 500-1000μl |
60 mm | 250-500μl |
6孔培养板 | 200-400μl /孔 |
24孔培养板 | 100-200μl /孔 |
96孔培养板 | 50-100μl /孔 |
4、将裂解液转移至新的离心管中,冰上孵育20分钟,使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中,进行下一步分析。
悬浮细胞蛋白提取
1、悬浮细胞,2,500×g离心5分钟,弃去上清。
2、可选步骤:若培养基中含有酚红或其他可能影响实验结果的物质,请使用PBS漂洗细胞。漂洗后的细胞悬浮液2,500×g离心5分钟,弃去上清。
3、加入适量RIPA Lysis Buffer(Strong)(使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂),每5×106细胞加入约200-500μl RIPA Lysis Buffer(Strong),吹打均匀。
4、冰上放置20分钟,使细胞充分裂解。
5、14000×g离心10分钟。转移上清液至新管中,进行下一步分析。
二、组织样品
1、取适当的RIPA Lysis Buffer(Strong),在使用前2-3分钟内加入蛋白酶抑制剂。
2、称量实验组织的重量,按照1:10(g/ml)的比例加入RIPA Lysis Buffer(Strong)后将组织剪成细小碎片,用电动匀浆器匀浆处理。若需要浓缩的蛋白提取物,可适当减少组织蛋白抽提试剂使用量。
3、冰上孵育20分钟,使细胞充分裂解。
4、14000×g 离心10分钟。转移上清液至新管中,进行下一步分析。
注:RIPA裂解液的裂解产物中可能会出现一小团透明胶状物,属正常现象。该透明胶状物为基因组。
表2 蛋白裂解液性能、参数比较
目录号 | WE0258 | WE0257 | ||
名称 | RIPA裂解液(强) | RIPA裂解液(中) | RIPA裂解液(弱) | SDS裂解液 |
裂解强度 | 强 | 中 | 温和 | 强 |
有效裂解成分 |
1%Triton X-100, 1%脱氧胆酸钠, 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.5%脱氧胆酸钠 , 0.1% SDS |
1% NP-40, 0.25%脱氧胆酸钠 | 1%SDS |
膜蛋白提取 | 很好 | 较好 | 一般 | 很好 |
胞浆蛋白提取 | 很好 | 很好 | 很好 | 很好 |
核蛋白提取 | 很好 | 较好 | 较好 | 很好 |
主要用途 | WB,IP | WB,IP | WB,IP,CO-IP | WB,CHIP |
储存条件:2~8℃
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