WE0192 超纯RNA提取试剂盒

超纯RNA提取试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，仅用于生物化学研究方面，我公司专注于RNA提取纯化产品的研发、生产和供应，为您提供的超纯RNA提取试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括超纯RNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：超纯RNA提取试剂盒
英文名称：SuperPure RNA Extraction Kit
产品货号：WE0192
产品规格：50次|200次

  本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒，裂解液充分裂解并匀质化样本，采用独特的硅基质膜吸附技术，通过离心吸附柱在高盐状态下专一的结合溶液中的RNA，同时zuì大限度的有效除去蛋白质、无机盐离子及有机杂质等；可从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中快速提取总RNA，每次可处理 30-50 mg组织或5×106细胞，可同时处理多个不同样品。本试剂盒提取得到的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。

试剂盒组成：

组份	50次
TRIzon Reagent	60ml
Buffer RW1	40ml
Buffer RW2(浓缩液)	11ml
RNase-Free Water	10ml
吸附柱RM及收集管	50套
RNase-Free离心管(1.5ml)	50个

保存条件：TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其他组分室温(15～30℃)。

自备试剂：lǜ仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。

产品特点：
1、纯度高：zuì大限度除去蛋白质等杂质，提取的RNA可直接用于下游各种实验。
2、提取量大：独特的裂解液配方，充分裂解细胞或组织，RNA提取量多至100μg。
3、快速：步骤少，操作简单，节省时间。
4、兼容性强：适用于多种动植物组织和细胞RNA的提取。

实验前准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
3)配制溶液应使用无RNase的水。
4)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。
4、次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。
6、若下游实验对DNA非常敏感，建议用不含RNase的DNase I(货号：WE0213S)对RNA进行处理。

操作步骤：
1、样品处理
①植物组织：取新鲜植物组织在液氮中充分研磨或将植物组织剪碎后直接在TRIzon Reagent中迅速研磨，每30-50 mg组织加入1ml TRIzon Reagent，混匀。
注意：样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。
②动物组织：取新鲜或-70℃冻存的动物组织尽量剪碎，每30-50 mg组织加入1ml TRIzon Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。或在液氮中研磨后加入TRIzon Reagent 1ml混匀。
注意：样品体积一般不要超过TRIzon Reagent体积的10%。
③单层培养细胞：吸去培养液，可直接在培养板中加入适量TRIzon Reagent(每10cm2 面积需要1ml TRIzon Reagent)，用取样器反复吹打使细胞裂解。也可用胰蛋白酶处理后，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清，加入TRIzon Reagent 1ml混匀。
注意：
1)收集细胞数量不要超过1×107。
2)TRIzon Reagent加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果TRIzon Reagent加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
3)收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。
④细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-1×107动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加入1ml TRIzon Reagent。
注意：
1)加入TRIzon Reagent前不要洗涤细胞，以免RNA降解。
2)一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理。
⑤血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积的TRIzon Reagent(推荐0.25ml全血加入0.75ml TRIzon Reagent)，充分振荡混匀。
⑥可选步骤：对于蛋白、脂肪、多糖或胞外物质含量高的样品，如肌肉组织、脂肪组织或植物的块茎，可以在匀浆处理后4℃，12000rpm(~～13400×g)离心10分钟以除去不溶物质，此时沉淀中含胞外物质、多糖和高分子量的DNA，而RNA存在于上清中。

2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μllǜ仿的比例加入lǜ仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心10分钟，此时样品分为三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制)，颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入700μl Buffer RW1，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9、重复步骤8。
10、12000rpm离心2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。
注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应(酶切、PCR等)。
11、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤11。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤11。

储存条件：室温(15～30℃)。

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货号	名称	规格
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名称：非冻型组织RNA保存液
货号：BTN3060
规格：250mL
本RNA保存液是一种在较高温度下保存RNA样品的非冻型溶液，它能迅速渗入细胞内，通过抑制 RNase的活性而保存RNA的完整性。

产品特点：
1. 操作简单，将组织剪薄浸没在RNA保存液中即可使其RNA不被降解。
2. 替代液氮，使样品的保存不需液氮，干冰或-80℃冰箱，尤其适用于临床和野外样品的快速和大规模采集。
3. RNA完整，因本产品能迅速抑制组织中RNA酶的活性，故从中提取的RNA的质量跟液氮保存的样品相比不相上下。
4. 方便运输，处理过的样品能在 25℃保存一周，使样品邮寄和运输变得容易和，有利学术合作和交流。
5. 反复冻融，经本产品处理的样品可反复冻融20次，其间可对样品进行各种处理而不影响zuì终提取的RNA的质量。
6. 结果准确，本产品进入细胞十分快速，基因表达在发生应急改变前就得以锁定，故RNA分析更能反映取样时的真实情况。
7.可比性强，本产品能减少大规模样品处理中的误差，增加各次实验数据间的可比性，对大规模基因表达谱的分析尤其有用。
8. 兼容性广，虽然处理过的样品可以使用动物RNA提取试剂盒和TRIzol等试剂提取其RNA，样品还可直接用于组织切片，免疫学和流式细胞分析而不影响RNA提取的质量。

储存条件：常温运输及保存，有效期二年。

使用方法：

一：用本产品保存新鲜组织样品
1. 估计完全浸没样品所需要本产品的体积(1g组织需10mL)。
2. 标记收集管并加入估计所需量的本产品。
3.以zuì快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注: 鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
4. 将组织碎块完全浸没于收集管的本产品中。
5. 将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超过该温度下的zuì长存放时间，如果要存放在-20℃或-80℃，需先将样品在 4℃放置过夜后再转移到zuì后的温度。注：将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液。常见存放温度与其zuì长存放时间关系为如下：

保存温度	时间及效果
37℃	一天(保存三天的样品 RNA有部分降解)
18-25℃	一周(保存两周的样品 RNA有轻微降解)
2-8℃	一个月
-20℃和-80℃	长期

6.从存放处取出样品(-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化)，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
7. 立即开始RNA提取或进行其他处理(如将样品分割成更小的碎块再重新保存等)。注:样品可以反复冻融二十次而其 RNA 质量不会受到影响。

二：本产品保存培养细胞、悬浮细胞、细菌和RNA 病毒
1. 标记收集管。
2. 将待样品转移到离心管中，离心收集细胞，弃上清。注:处理含病毒的样品(如血浆)可直接从步骤第4 步开始。
3. 用冰浴的缓冲液洗一次。
4. 将细胞悬浮在少量缓冲液中。
5. 加入五到十倍体积的本产品，混均; 对病毒样品，加入两到三倍体积的本产品，混均。
6. 将收集管存放于温度适当的地方，存放时间不能超该温度下的zuì长存放时间。
如果要存放在-20℃或-80℃，需先在4℃放置过夜后再转移到zuì后温度条件(将样品转移到-20℃或-80℃前，需要倒弃保护液)。注:样品存放温度与其zuì长存放时间关系为如下：

保存温度	时间及效果
37℃	一天(保存三天的样品 RNA 有部分降解)
18-25℃	一周(保存两周的样品 RNA 有轻微降解)
2-8℃	一个月
-20℃和-80℃	长期

7. 取出样品，室温下融化(-20℃或-80℃保存的样品需先在室温下融化)。
8. 加入一倍体积的预冷的缓冲液(如PBS)，用常规离心法收集细胞并用缓冲液洗一次。病毒样品可免去此步骤。
9.细胞直接用于RNA的提取或其他处理。

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