WH0065 总RNA提取试剂

总RNA提取试剂由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科研目的，我公司的总RNA提取试剂品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括总RNA提取试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：总RNA提取试剂
英文名称：Total RNA Extraction Reagent
产品货号：WH0065
产品规格：100ml

本制品是基于异硫氰酸胍/苯酚法的一种即用的从细胞和组织中提取总RNA的试剂，在样品裂解或匀浆过程中，本制品可保持RNA完整性，同时裂解细胞，溶解细胞内含物。加入氯fǎng后，溶液分为水相、中间层和有机相，RNA在水相中。取出水相，用异丙醇可沉淀回收RNA；中间层用乙醇沉淀可回收DNA；有机相用异丙醇沉淀可回收蛋白。本制品可用于小量样品（50-100mg组织、5×1067
产品特点：
·本制品为黄颜色，便于区分水相和有机相，方便使用。
· RNA纯度高：可有效去除DNA残留、有机溶剂污染和蛋白杂质。
· RNA得率高，可用于多种下游实验。

储存条件：2-8℃避光保存12个月。

自备试剂：氯fǎng、异丙醇、RNase-free ddH2O、75%乙醇（用RNase-free ddH2O配制）。

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用无RNase的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在裂解液RL中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用无RNase的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V)，放置过夜，高压灭菌。）

使用前注意事项：
1．匀浆后，加氯fǎng前，样品可在-70℃放置一个月以上；
2．RNA沉淀可以保存在75%酒精中，2-8℃一个星期以上或-20℃一年。

操作步骤：
1．匀浆处理
a．植物组织：以叶片RNA提取为例。取新鲜叶片在液氮中充分研磨或将叶片剪碎后直接在本制品中研磨，研磨要迅速，zuì好不要超过1 min。大约100mg叶片使用1ml本制品。
b．动物组织：以鼠肝脏RNA提取为例。取新鲜或-70℃冻存组织，每30-50 mg组织加入1ml本制品，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积一般不要超过本制品体积的10%。
c．单层培养细胞：单层贴壁细胞的收集（收集细胞数量请不要超过1×107   1)直接裂解法：直接在培养板中加入本制品裂解细胞，每10cm2面积加入1ml本制品。用取样器吹打几次。注意：本制品加量根据培养板面积决定，不是由细胞数决定。如果本制品加量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。
  2)胰蛋白酶处理法：确定细胞数量，吸除培养基，用PBS洗涤细胞，吸除PBS，向细胞中加入含有0.1-0.25%胰蛋白酶的PBS处理细胞，当细胞脱离容器壁时，加入含有血清的培养基失活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至RNase-Free的离心管中，300×g离心5 min，收集细胞沉淀，仔细吸除所有上清。
  注意：收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，否则会导致裂解不完全，造成RNA的产量降低。
d．细胞悬液：离心取细胞。每5×10⁶-10⁷动物、植物和酵母细胞或每10⁷细菌细胞加入1ml本制品。加入本制品前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。一些酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪处理。
e．血液处理：直接取新鲜的血液，加入3倍体积本制品（推荐0.25 ml全血加入0.75 ml本制品），充分振荡混匀。
2．将匀浆样品在15-30℃放置5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。
3．可选步骤：4℃ 12000rpm（~13400×g)离心10min，取上清。
  注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部分等，可离心去除。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织样品时，上层是大量油脂，应除去。取澄清的匀浆溶液进行下一步操作。
4．每使用1ml本制品加入0.2 ml氯fǎng，盖好管盖，剧烈振荡15 sec，室温放置3 min。
  注意：如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2 min代替。
5．4℃ 12000rpm（~13400×g)离心10-15 min，样品会分成三层：黄色的有机相，中间层和上层无色的水相，RNA主要在水相中，把水相（约600μl）转移到新的离心管中。（如要分离DNA和蛋白质，可向我公司索取提取方法)。
6．在得到的水相溶液中加入等体积异丙醇，混匀，室温放置20-30 min。
7．4℃ 12000rpm（~13400×g)离心10min，去上清。离心前RNA沉淀经常是看不见的，离心后在管侧和管底形成胶状沉淀。
8．加入1ml 75%乙醇（RNase-Free ddH2O配置)洗涤沉淀。每使用1ml本制品至少用1ml75%乙醇对沉淀进行洗涤。
9．4℃ 5000rpm（~2,300×g)离心3 min。倒出液体，注意不要倒出沉淀，剩余的少量液体短暂离心，然后用枪头吸出，注意不要吸到沉淀。
10．室温放置晾干（不要晾的过干，RNA完全干燥后会很难溶解，大约晾干2-3 min左右即可），根据实验需要，加入30-100 μl RNase-Free ddH2O，反复吹打、混匀，充分溶解RNA。

不同组织或细胞RNA提取预期得率：
植物叶片：100～200μg/g叶片
动物组织：6～10μg/mg肝脏组织
动植物培养细胞：5～10μg/10⁶细胞
大肠杆菌：2～10μg/ml DH5α过夜菌
血液：3～5μg/ml人类全血

常见问题分析：

低得率：
A．样品裂解或匀浆处理不彻底。
B．zuì后得到的RNA沉淀未完全溶解。

A260/A280<1.65：
A．检测吸光度时，RNA样品不是溶于TE，而是溶于水。低离子浓度和低pH条件下，A280值会较高。
B．样品匀浆时加的试剂量太少。
C．匀浆后样品未在室温放置5 min。
D．水相中混有有机相。
E．zuì后得到的RNA沉淀未完全溶解。

RNA降解：
A．组织取出后没有马上处理或冷冻。
B．样品或提取的RNA沉淀保存于-5℃- -20℃，未在-60℃- -70℃保存。
C．细胞在胰蛋白酶处理时被破坏。
D．溶液或离心管未经RNase去除处理。
E．电泳时使用的甲酰胺pH低于3.5。

DNA污染：
A．样品匀浆时加的试剂体积太少。
B．样品中含有组织溶剂（如乙醇，DMSO等)，强缓冲液或碱性溶液。

蛋白和多糖污染：
A．样品中蛋白、多糖含量高。
B．样品量太大。
C．水相中混有有机相。

根据您的关注的总RNA提取试剂，您可能还对以下产品有需求：



名称：细菌RNA提取试剂盒
货号：BTN51102
规格：100次
本试剂盒是在动物RNA提取试剂盒基础上根据细菌提取的具体情况改良而得。它基于异硫氰酸胍/酚/氯fǎng提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以选择真菌RNA提取试剂盒。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，只要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 所得 RNA 质量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 灵敏度高，可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总 RNA。
4. 高于进口同类产品。

试剂盒组成：

成分	规格
细菌RNA提取试剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌(注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用zuì新鲜细菌)，吸尽液体培养基，加入1mL细菌RNA提取试剂盒并用枪充分吹打，确保细菌全部裂解，没有块状物。
 如果使用菌落，则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA提取试剂盒的1.5 m塑料离心管中，用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时，建议使 用助沉剂 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL 氯fǎng，在振荡器上充分振荡混均 30秒(必须将管底的液体振荡起来，否则不能有效将DNA 打断和去除蛋白质)。
3. 12000～15000g室温离心3分钟。上清液无色，下层液呈篮色，中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净 1.5ml塑料离心管中，上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质，建议分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。当细菌数量较少时，中间层十分松散，上清时很容易吸到下层有机相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
5. 12000～15000室温离心 3-10分钟，RNA 将在管底侧面形成沉淀。
6.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
7.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
8. 12000～15000g室温离心 1分钟。
9.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
10. 重复第 8 到第 10 步一次。
11. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μl)。
12. 短暂放 1-2分钟后加入适量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
13. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼酸是研究多糖的经典方法----硼酸络合法中的关键成分，硼酸通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼酸与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼酸对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
 由于细菌细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由23S(约3700nt)，16S(约1700nt)和5S(约100nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合 EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量和产率。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液 pH相关，而 DEPC 水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液 pH降低进而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 纯度测定：
 无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯fǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议zuì好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼酸能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

关注总RNA提取试剂，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：


BTN110810 病毒沉淀剂 100mL
BTN101109 粪便RNA柱式提取试剂盒 50次
BTN130978 血清血浆游离RNA提取试剂盒 50次
BTN90904 膜结合DNA清除试剂盒 50次
ALH042 骨RNA提取试剂盒 50次
SY0267 动植物组织RNA稳定液 100ml
BTN80802 非冻型拭子DNA保存液 100mL
MT0002 全血microRNA提取试剂盒 25T|100T

如果您觉得“WH0065 总RNA提取试剂”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从仪器交易网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.yi7.com/com_bjbiolab/sell/itemid-8551589.html
已经有902位访客查看了本页.