ALH375 改良Bradford法蛋白定量试

改良Bradford法蛋白定量试的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多改良Bradford法蛋白定量试等蛋白质研究产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括改良Bradford法蛋白定量试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：改良Bradford法蛋白定量试剂盒
英文名称：Protein Quantitation Kit By Bradford
产品货号：ALH375
产品规格：1000次|2500次

本试剂盒是在上常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford法基础上（考马斯亮蓝结合显色法）改进而成。当Bradford染色液（考马斯亮蓝）和蛋白在酸性条件下结合时，zuì大吸光值波长立刻由465 nm转移至 595nm，同时颜色由褐色转为蓝色，通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值，推算出蛋白浓度。

试剂盒组份(1000次)：
蛋白标准（5mg/ml BSA）—————1ml
Bradford染色液—————————200ml

产品特点：
1.灵敏度高，检测浓度下限达到25μg/ml，zuì小检测蛋白量达到0.5μg，待测样品体积为1-20μl。
2.检测速度快，10-20个样品只需不足10分钟即可完成。
3.在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。

注意事项
1. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
2. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团，每次使用前请颠倒6～8 次并且竖直抓住瓶口做水平划圈动作，旋转瓶中液体，帮助充分混匀，但不可以上下振荡混匀。
3. 低温会降低Bradford 染色液的敏感度，因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室温。仅仅将需要的Bradford 染色液复温，可以减少复温时间。倒出每次需要的Bradford 染色液回复到室温，将原瓶放回冰箱。
4. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时，如果吸量不准确或者加样枪不会造成标准曲线相关系数减小，可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制，或者使用度高的加样枪。
5. 由于Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候，颜色反应并不成比例增加，因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线，每次应按照实际测得的标准曲线计算出大致的蛋白浓度。
6. 需要酶标仪一台，zuì佳检测波长为595nm，也可以在570-610nm 之间波长测定，但会降低一些敏感度；并需96 孔板。如果没有酶标仪，也可以使用普通的分光光度计测定，但是测定蛋白浓度时，需根据测定吸光度的杯子的体积，按比例调整Bradford 染色液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时，每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
7. Bradford 法测定蛋白浓度不受大部分样品中的化学物质的影响，样品中巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%，Triton X-100 低于0.125%，Tween 20 低于0.06%。可以考虑用超纯水稀释，透析/除盐，ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。

储存条件：-20℃，有效期9个月。

本制品别名：改进型Bradford法蛋白定量试剂盒|Bradford蛋白浓度测定试剂盒

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名称：卵白蛋白标准品(2mg/mL)
货号：BTN90610
规格：1mL
本产品是浓度为2mg/mL的卵白蛋白，用做蛋白测定的标准品。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：Bradford蛋白定量试剂盒
货号：WE0275
规格：800次微孔板(100管次)
  Bradford 法是zuì简单和快速的比色蛋白定量方法。 这一方法基于考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后， 产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595 nm处有zuì大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可通过检测595 nm的光吸收值的大小来计算蛋白的含量。本产品将传统的Bradford方法进行了改良，zuì大限度的加大蛋白定量的线性范围，变异性小于普通考马斯亮蓝染色法，灵敏度范围为100-1,500μg/ml。使用本产品反应迅速，颜色产物1小时内保持稳定。本试剂盒适用于多种缓冲液系统，不受金属离子、还原剂和螯合剂的干扰。

试剂盒组成：

组成	规格
Bradford Protein Assay Reagent	2×100ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

注意事项：
1、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水进行稀释)。
2、本试剂盒不适合含有去污剂的蛋白定量，具体干扰物质(具体见附表1)，可采用BCA蛋白定量试剂盒(WE0276)或其他蛋白定量产品。
3、所测蛋白分子量必须大于3 kD。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品zuì终浓度(μg/ml)
A	0	100	2000
B	50	150	1500
C	200	200	1000
D	200	200(从C管中取)	500
E	200	200(从D管中取)	250
F	200	200(从E管中取)	125
G	200	0	0(空白)

2、试管检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)按上表稀释标准品，将30μl稀释好的BSA标准品分别加到作好标记的试管中。
2)取干净的试管，分别加入30μl待测蛋白样品(原液或稀释液)，并作好标记，推荐每个测定做2-3个平行反应。
3)向步骤1)和步骤2)的试管中各加入1.5ml Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，室温放置10分钟。
4)用分光光度计测定595 nm处的吸光值。
5)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
6)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

3、微孔检测(检测范围：100-1500μg/ml)
1)将按表1稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各5μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。
2)每孔加入250μl Bradford Protein Assay Reagent，充分混匀，盖上96孔板盖，室温放置10分钟。
3)用酶标仪测定595 nm处的吸光值。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：数据处理时需要去除明显错误的值。未知样品浓度可以从标准曲线中查得, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。如果是计算机绘制的曲线，可以从计算机给出的线性方程式计算出未知样品的浓度。
5)如果所得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

附表1. 干扰物质表

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.6M
甘氨酸	0.1M
HEPES	0.1M
MES	0.7M
MOPS	0.2M
Na+-柠檬酸	50mM
PIPES	500mM
磷酸钠/磷酸钠	1M
乙酸钠	0.6M
Tris	2M
盐类
硫酸铵	1M
NaCl	1M
尿素	6M
性化合物
甘油	99%
还原剂
β-巯基乙醇	1M
DTT	1M
去垢剂和变性剂
Brij35	干扰
脱氧胆酸纳	0.25%
CHAPS	1%
NP-40	干扰
辛葡糖	2%
SDS	0.1%
Tween-20	干扰
Triton X-100	0.1%
糖类
蔗糖	1mM
螯合剂
EDTA	100mM
EGTA	50mM
其他
HCl	0.1M
NaOH	0.1M
NAD	1mM
苯	5%

储存条件：2～8℃

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