QN2678 WB化学发光法检测试剂盒

WB化学发光法检测试剂盒是高品质的免疫检测产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科研试验，我公司专注于免疫检测产品的研发、生产和供应，为您提供的WB化学发光法检测试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：WB化学发光法检测试剂盒(人IgG)
英文名称：ECL Western Blotting Detection Kit(Human IgG)
产品货号：QN2678
产品规格：1kit

SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带（抗原所在位置）。

产品内容：
封闭试剂：30g(可配制400ml)。
10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
HRP标记二抗，0.3ml，效价1:500～1000。
ECL显色液，25ml A液 + 25ml B液。
保存条件：-20℃避光密闭保存，有效期一年。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于 2-8℃以方便使用。

操作步骤(仅供参考)：
常规电泳转膜后：
1．清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2．按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液（pH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3．将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×(10ml 10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三个月)。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4．用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
  注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5．用TBS-T 缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6．用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入15μl HRP标记二抗的比例，配制二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回收第二天
再使用一次。
7．用TBS-T缓冲液（pH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8．根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1～5分种。倾去显色液，小心用纸吸去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。

注意事项：
1．请根据一抗来源选择试剂盒。
2．可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长zuì终漂洗次数与时间。如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
3．TBS-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取NaCl 8.5g，Tris 1.21g，用800ml双蒸水溶解，用盐酸调pH到7.6，再加入0.5ml Tween-20，用双蒸水 加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配制）

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货号	名称	规格
YT069	Western洗涤液(10X)	100ml|10×100ml
YT095	甘油明胶封片液(Kaiser封片液)	10ml
YT371	辣根过氧化物酶标记链霉亲和素	200μl
ZN1868	4%多聚甲醛溶液(不含DEPC)	500ml
ZN1902	硝酸纤维素薄膜(NC膜)0.22μm 9cm×10cm	20片
ZN1949	防脱片玻片(多聚赖氨酸处理)	50片
ZN1970	HE染色试剂盒	2×100ml

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名称：BCIP/NBT碱性磷酸酯酶显色试剂盒
货号：YT078
规格：共100ml
本试剂盒是一种用于免疫组化显色、Western等膜显色和诱导多功能干细胞iPS鉴定等的试剂盒。

碱性磷酸酯酶常被称作碱性磷酸酶(EC 3.1.3.1)，是一类水解酶，通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基，其去磷酸化作用的底物包括核苷酸、蛋白质和生物碱等，并在碱性条件下zuì为有效。该酶是一组同功酶的统称。常见的小牛肠碱性磷酸酶被广泛用于二抗等的标记zuì终用于蛋白和核酸等的检测，也常用于DNA或RNA 5’和3’末端的去磷酸化(去单磷酸化)，特别是质粒的5’末端去磷酸化以避免质粒自连等。

BCIP/NBT是碱性磷酸酯酶的常用底物。在碱性磷酸酯酶的催化下，BCIP会被水解产生强反应性的产物，该产物会和NBT发生反应，形成不溶性的深蓝色至蓝紫色的NBT-formazan。

本试剂盒可以用于细胞或组织的碱性磷酸酯酶显色包括诱导多功能干细胞iPS的鉴定，也可以用于Western等结合有碱性磷酸酯酶的膜的显色检测。同时也可以用于细胞或组织内源性的碱性磷酸酯酶显色。

试剂盒组份：
碱性磷酸酯酶显色缓冲液————100ml
BCIP溶液(300X)————————350μl
NBT溶液(150X) ————————700μl

储存条件：4℃，有效期一年。

名称：封闭液(用TBS配置，不含去垢剂)
货号：YT874
规格：100ml
本品是zuì新一代的快速封闭液，总体效果显著优于传统的基于BSA(牛血清白蛋白)、脱脂奶粉、酪蛋白(Casein)等的封闭液及国外同类产品，可以用于Western blot (WB)、Immunofluorescence (IF)、Immunohistochemistry (IHC)、Immunocytochemitry (IC) 等实验中的封闭、一抗或二抗的稀释。本产品配制在TBS中，不含去垢剂。 按照每张膜封闭需要5-10ml封闭液计算，一个包装的本产品 可以封闭10-20张膜。

本封闭液快速。封闭时间通常仅需5-15分钟，并且和BSA、脱脂奶粉、酪蛋白等传统封闭液以及国外同类的快速 封闭液相比，显示出更强的信噪比(参考下图)。

本封闭液封闭后背景低。本封闭液不含血清和白蛋白，确保高的信噪比。

本封闭液兼容性好，兼容辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶和生物素标记的二抗。本产品中添加了不影响HRP和AP活性的防腐剂，不会干扰HRP或AP标记二抗的检测。同时本产品不含生物素，不会干扰基于生物素的检测。

本封闭液使用灵活。本产品配制在TBS中，可以直接用于相关实验，但也可以根据实验需要自行添加Tween-20或Triton X-100 至终浓度为0.05%-0.1%后用于封闭、一抗或二抗的稀释。

本产品与BSA及国外同类产品的封闭效果对比参见下图。在相同样品和实验条件下，仅封闭液及封闭时间存在如下图所示的差异时，我公司的本封闭液封闭后的整体背景明显低于BSA封闭后的背景，而且目的条带亮度明显高于国外同类品牌产品。


每组实验从左到右依次为：5μl蛋白Marker，2.5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液，5μg蛋白量的HeLa细胞裂解液。请注意对于抗体A，本封闭液比BSA和国外同类产品具有更低 的背景，并且和国外同类产品相比信号明显更强。对于抗体B，本封闭液比BSA具有更低的背景，和国外同类产品相比信号明显更强。实际实验结果会因样品、抗体、实验条件等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。

注意事项：
1. 本产品推荐仅使用一次，重复使用可能会导致封闭效果下降。但对于一些信噪比很高的一抗，例如一些内参抗体，本封闭液可以重复使用2-3次。回收的封闭液请勿与未使用 过的封闭液混合。
2. 通常本产品用于PVDF膜及NC膜时的封闭时间为5-15分钟。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试将封闭时间延长为30-60分钟。此外，如有特殊需要，也 完全可以4℃封闭过夜。
3. 由于没有任何一种封闭液是适用于所有实验体系的，因此对于一些特殊的实验，可能需要根据具体情况考虑使用其它更合适的封闭液。
4. 取放PVDF膜和NC膜应使用平头镊子，并仅轻轻夹取其边角，操作过程须避免膜表面产生划痕、折痕或压痕等痕迹。
5. PVDF膜一经浸润和活化，需一直保持湿润，根据Western进行到的具体步骤可放置于western转膜液或洗涤液等适当溶液中，否则可能会产生难以封闭的异 常背景。
6. 在背景较高的情况下，为进一步提高信噪比，本产品中可以自行添加Tween-20或Triton X-100至终浓度为0.05%-0.1%。

储存条件：4℃，有效期一年。

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