XH005 植物线粒体提取试剂盒
产品简介
植物线粒体提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持,本品用于科研试验,本品质量稳定,价位合理,需要植物线粒体提取试剂盒等亚细胞结构研究产品的客户,请到我公司官网联系我们。...
产品详细介绍
特别提示:包括植物线粒体提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:植物线粒体提取试剂盒
英文名称:Plant Mitocho
产品货号:XH005
产品规格:50T|100T
本试剂盒可用于从植物叶片组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体的制备。其制备物,可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。
试剂盒组成:
组份 | 50T | 100T |
Lysis Buffer | 100mL | 200mL |
β-巯基乙醇 | 1mL | 1mL |
Mito-Wash Buffer | 25mL | 50mL |
Store Buffer | 5mL | 10mL |
保存条件:4℃可保存3个月,长期保存可置-20℃。
操作步骤:
1.样本采集前处理:无论田间自然生长还是实验室组织培养,采摘前须避光生长24-48小时,以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量Lysis Buffer,加入0.5% β-巯基乙醇,10ml Lysis Buffer加入50μlβ-巯基乙醇,混匀,形成Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,此溶液可2~8度保存一个月。
2.叶片用蒸馏水清洗2-3次,滤纸吸干,有条件请用液氮研磨叶片1-2克,研磨完后,取800mg左右研磨的叶片粉,加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀。如果无条件(无液氮),请预冷研钵,取洗过的叶片1000mg,用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,冰上研磨至看不见明显组织块;
3.将研磨物放置合适的离心管,4℃,1000×g离心5min;
4.将上清转移到一新的离心管中,在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液,混匀,再次4℃,1000×g离心5min,取上清;合并两次上清,将上清4℃ 1000×g再次离心5min。
5.取上清,加入一新的离心管中,4℃,16,000×g离心10min。离心后的上清含胞浆成分,可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管,线粒体沉淀在管底。
6.在线粒体沉淀中加入0.5mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀,4℃,1000×g离心5min;
7.取上清,加入一新的离心管中,4℃,16,000×g离心10min。弃上清,高纯度的线粒体沉淀在管底;
8.用50 -100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀,立即使用或-70℃保存。
注意事项:
1.以离心力g计算正确的离心速度,不同的离心机可据此计算离心速度。
2.进行Western Blot和2D-胶电泳,可直接在第7步的沉淀中加入上样缓冲液裂解线粒体。
3.β-巯基乙醇有毒,请注意通风及防护。
一般低温度心机都有离心力显示,如果没有,可以用以下公式简单的换算。
G=1.11×(10-5)×R×[rpm]2
G为离心力,一般以g(重力加速度)的倍数来表示;[rpm]2即:转速的平方;R为半径,单位为厘米。
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