SY0294 耐热逆转录酶II
产品简介
耐热逆转录酶II由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持,本品用于科研目的,我公司的耐热逆转录酶II品质上佳,经过多年的开发生产,已然非常成熟,欢迎广大新老客户订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括耐热逆转录酶II在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:耐热逆转录酶II
英文名称:Reverse Trans
产品货号:SY0294
产品规格:2000U
Reverse Trans
活性定义:以Poly(rA) Oligo(dT)为模板/引物,在37℃,10min内,掺入1 nmol的dTTP为酸不性溶物质所需要酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制
核酸外切酶残留检测:200 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在37 ºC下孵育1h,DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测:200 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在37 ºC下孵育1h,DNA的电泳谱带不发生变化。
RNase残留检测:200 U本品和1 μg小鼠肝脏总RNA在37 ºC下孵育1h,RNA电泳谱带不发生变化。
功能检测1:逆转录体系中加入200 U本品,以100 pg Hela cell total RNA为模板,Oligo(dT)23为引物,50 ºC反应30min。取10% cDNA产物进行PCR扩增β-actin基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的550 bp条带。
功能检测2:逆转录体系中加入200 U本品,以500 ng Hela cell total RNA为模板,Oligo(dT)23为引物,55 ºC反应45min。取10% cDNA产物进行PCR扩增Polε基因。琼脂糖凝胶电泳,EB染色,可见有单一的4.8 kb (GC-rich)条带。
功能检测3:逆转录体系中加入200 U本品,以1 pg-1 μg Hela cell total RNA为模板,Oligo(dT)23VN和Random Hexamers为引物,测试qRT-PCR 性能。以6个数量级的模板量的对数值对Ct值做标准曲线,R2>0.990,斜率在-3.20到-3.60之间。
准备工作
1. 防止RNase污染:请保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。
2. 引物选择:
2.1 后续实验为PCR
a, 如果模板为真核生物来源,一般情况下选Oligo dT18,与真核生物mRNA的3’Poly A尾配对,可获得zuì高产量的全长cDNA。
b, 基因特异性引物 (GSP)的特异性zuì高。但有些情况下,用于PCR反应的GSP无法有效引导链cDNA合成。这时,可改用Oligo dT18或Random hexamers重新进行逆转录。
c, Random hexamers特异性zuì低,所有RNA,包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级结构或GC含量较高,或者模板为原核生物来源,使用Oligo dT18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时,可使用Random hexamers为引物。
2.2 后续实验为qPCR
a, 将Oligo dT18与Random hexamers混合使用,可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成,有助于提高定量结果的重复性。
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