SV1045 T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶

T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，用于科学研究，我公司的T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶活性缺失）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶活性缺失）
英文名称：T4 polynucleotide kinase (3 phosphatase deficiency)
产品货号：SV1045
产品规格：1KU|200U

特性:
DNA 或 RNA 5´ 末端的磷酸化，以便进行连接反应。
DNA 或 RNA 的末端标记，用作探针和进行 DNA 测序
用 T4 多聚核苷酸激酶（M0201）除去 3´ 磷酸基团
T4 多聚核苷酸激酶（缺失 3´ 磷酸酶活性）（M0236）将 3´ 端已经磷酸化的单核苷酸 5´ 磷酸化，制备pNp 底物，用于添加到 DNA 或 RNA的 3´ 端
用 T4 多聚核苷酸激酶（缺失 3´ 磷酸酶活性）（M0236）对 3´ 端有磷酸基团的寡核苷酸的 5´ 端进行标记
概述:
T4 多聚核苷酸激酶能够催化 ATP 的 γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链（双链或单链 DNA 或 RNA）的 5´ -羟基末端以及 3´ -单磷酸核苷上。T4 多聚核苷酸激酶（M0201）还具有 3´ 磷酸酶活性，将 3´ -磷酸基团从寡核苷酸的 3´ 磷酸末端、脱氧 3´ -单磷酸核苷和脱氧 3´ -二磷酸核苷上水解掉。经修饰后的酶（M0236）具有所有激酶的活性，但是缺失了 3´ 磷酸酶活性。
来源:
重组 E. coli 菌株，克隆有 T4 多聚核苷酸激酶或修饰的 T4 多聚核苷酸激酶基因。
反应条件:
1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液
[70 mM Tris-HCl（pH 7.6 @ 25℃），10 mM MgCl2，5 mM DTT]，37℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 20 分钟。
注意事项:
达到zuì佳酶活力，需要新鲜缓冲液（在旧缓冲液中，由于氧化造成的 DTT 含量减少会降低酶活力）。
放射性标记反应:
50 μl 反应体系中，用 1X T4 多聚核苷酸激酶反应缓冲液、50 pmol 的 γ-[32P] ATP 和 20 单位的酶 37℃ 温育 30 分钟可催化 1-50 pmol 的 5´ 末端磷酸化。[33P] ATP 可代替 [32P] ATP 作标记反应。
CTP、GTP、TTP、UTP、dATP 及 dTTP 均可替代 ATP 作为磷酸供体。
DNA 或 RNA 磷酸化反应（放射性和非放射性）操作流程请联系我们咨询。
要提高平齐末端或 5´ 凹陷末端的磷酸化效率，可在加入 T4 多聚核苷酸激酶前，先将 DNA 溶液于 70℃ 加热 5 分钟，然后冰上冷却，并加入 5%（W/V）的 PEG-8,000。
T4 多聚核苷酸激酶需要 ATP 才能发挥活性，但是为了适用于高活力的放射性标记反应:，在随酶提供的反应缓冲液中不含 ATP。
一般来说，进行激酶反应之后是连接反应。在这种情况下，T4 多聚核苷酸激酶反应在连接酶反应缓冲液中 37℃ 温育 30 分钟即可。反应后的产物可直接进行连接，无需改变缓冲液和进行热失活。如果连接时需要保持其它 DNA 片段的去磷酸化状态，则需要在连接反应前热失活 T4 多聚核苷酸激酶。
质保声明:
T4 多聚核苷酸激酶和 T4 多聚核苷酸激酶（3´ 磷酸酶活性缺失）经过严格的质控检测，确保该产品具有zuì高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位即 1 个 Richardson 单位，指 37℃条件下，30 分钟内催化 1 nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量（1）。
浓度:
10,000 units/ml。

根据您的关注的T4 多聚核苷酸激酶（3′磷酸酶活性缺失），您可能还对以下产品有需求：



名称：人类cDNA
货号：WE0227
规格：100μl(20次反应)
  本产品是以人胎盘组织RNA为模板，Oligo(dT)以及Random为引物, 用百奥莱博的高灵敏度的逆转录酶反转录得到的PCR即用型cDNA，可用于PCR实验的阳性对照。纯度：OD260/280≈1.8

使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系：

试剂	50μl体系	终浓度
10×Taq PCR Buffer with Mg2+	5μl	1×
dNTP Mix，2.5 mM each	4μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Human Placenta cDNA	5μl
Taq DNA Polymerase，2.5 U/μl	0.5μl
RNase-Free Water	补水至50μl

注意：
1)引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)镁离子浓度请以终浓度1.5-3 mM作为设定范围的参考。本产品的10×PCR Buffer中已经含有15 mM镁离子，可根据丌同的引物对和模板来调节镁离子浓度，由此优化反应体系。

2、将混合好的液体进行PCR反应。
3、结果检测：反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液后进行琼脂糖凝胶电泳检测。

储存条件：-20℃，避免反复冻融

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货号	名称	规格
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