HR8573 细胞膜染色试剂盒(深红色)
M04细胞膜染色试剂盒是利M系列荧光探针进行细胞膜特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的M04细胞膜染色探针为绿色荧光标记的细胞膜探针,具有748/780nm的最大激发/发射波长。...
细胞膜染色试剂盒(深红色)
产品编号:HR8573
产品组成:
组份 |
1000T |
5000T |
组分A:细胞膜M04染料 |
500μL |
500μL×5 |
组分B:染料稀释液 |
10mL |
50mL |
细胞膜染色试剂盒(深红色)储存条件:
染料-20℃避光保存,稀释液2-8℃保存,有效期6个月。
【注】:
● 染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
● 染色液A为DMSO溶液,冬季气温较低时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
产品简介:
M04细胞膜染色试剂盒是利M系列荧光探针进行细胞膜特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的M04细胞膜染色探针为绿色荧光标记的细胞膜探针,具有748/780nm的最大激发/发射波长。
M系列探针是对活细胞的细胞膜进行选择性染色的一类荧光染料,该系列探针可以选择性标记细胞膜。当亲脂性的绿色荧光探针M04进入细胞膜后,在整个细胞膜上扩散,最佳浓度时可以使整个细胞膜染色。染色液M04在进入细胞膜之前荧光非常弱,当与细胞膜结合后其荧光强度大大增强,被激发后可以发出红色的荧光,具有很高的淬灭常数和激发态寿命。
荧光探针M04通常不会明显影响细胞的活力,因此被广泛用于正向或逆向的,活的或固定的神经等细胞或组织的示踪剂或长期示踪剂(long-term tracer)。除了最简单的细胞膜荧光标记外,还可以用于检测细胞的融合和粘附,检测发育或移植过程中细胞迁移,通过FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)检测脂在细胞膜上的扩散,检测细胞毒性和标记脂蛋白等。
M系列细胞膜探针具有多种颜色可以选择,可根据情况对样品进行多色标记实验。除了本试剂盒的深红色荧光探针,还可以提供绿色、橙色等颜色的染色试剂盒。
以96孔板每孔200μL染色液计,本试剂盒小包装可以染色1000-5000个样本。
细胞膜染色试剂盒(深红色)检测方法:
● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦
样本类型:
● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材:
● 激光共聚焦/荧光显微镜 ● PBS缓冲液 ● 或者HBSS(不含酚红)
使用注意事项:
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体收集至管底,避免开盖时液体洒落。
● M04染色液为DMSO溶液,冬季气温较低时在室温时为凝固状态,极易粘附在管壁、吸头壁。
注意需要加热溶解,吸头也需要放在培养箱预热,否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前,先将本品取出回温至室温,并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 标记的条件因细胞种类而异,根据不同样本的实际染色结果做相应调整,在每次实验前,请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化,确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● 染色后立即进行分析。
● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。
使用方法:
1、染色工作液的配制:
根据样本数量,用37℃培养箱预热染料稀释液试剂B将M04 荧光染料10倍稀释。再用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针M04进行40-200倍稀释,配制成染色工作液。
【注】:
● 也可以不使用本试剂盒中的试剂B,直接用HBSS等缓冲液或相应的无血清培养基稀释M04染料至所需浓度。
● 开始实验前,使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度,建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度为试剂盒中染料母液的400-2000倍稀释,1000-2000倍适合大多数细胞样本。
● 建议收到产品后,根据单次使用量,对母液进行小量分装,每次使用一管,试剂-20℃避光冻存,一年稳定。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性,建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育,荧光信号会衰减。
2、细胞染色
悬浮细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2次。
【注】:
● 500×g离心5分钟。
2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞,使其密度大约为1×106/mL。
3) 在37℃孵育细胞5~120分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】:
● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
4) 孵育结束,500×g离心5分钟。
5) 倾倒上清液,再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。
6) 重复(4),(5)步骤两次以上。
贴壁细胞染色
1) 用PBS洗涤细胞2 次。
2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。
【注】:
● 96孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。
3) 37℃孵育细胞5~120分钟,不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间,之后优化体系以得到均一的标记结果。
【注】:
● 若染色不够充分,建议增加染料浓度或延长染色时间。
4) 吸干染色工作液,用培养液洗培养板或盖玻片2~3次,每次用预热的培养基覆盖所有细胞,孵育5~10分钟,然后吸干培养基。
3、用荧光显微镜或流式细胞仪检测
激发波长为748nm,最大发射波长为780nm。
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