HR8193 微藻细胞核提取试剂盒

本试剂盒适用于常见的各种绿藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等单细胞、多细胞、丝状体、多核体等形态真核类藻类。配合适当方法调整，也可以用于蓝藻等原核藻类的细胞器提取。...

微藻细胞核提取试剂盒

 

产品编号：HR8193

产品组成：

微藻细胞核提取试剂盒储存条件：

提取液A、C、D 2-8℃保存；提取液B -20℃保存。有效期1年。

产品简介：

微藻细胞核提取试剂盒提供全套试剂，适用于从各种真核类微藻中提取细胞核。此试剂盒提供了一个系统，维持核组分是分开和完整的。优化的试剂配方和程序可以快速分离胞核，而绝少交叉污染。

本试剂盒适用于常见的各种绿藻、金藻、硅藻、甲藻、螺旋藻等单细胞、多细胞、丝状体、多核体等形态真核类藻类。配合适当方法调整，也可以用于蓝藻等原核藻类的细胞器提取。

本试剂盒提取的胞核组分仍保持其生化功能，适合各种下游分析如核蛋白提取、转录活性，RNA拼接，gel－shift分析，报告分析，酶活性分析和WB等。

试剂盒以外自备试剂耗材和仪器：

● 移液器 ● 离心机 ● 振荡器 ● 涡旋混匀器 ● PBS ● β-巯基乙醇（备选）

注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM）两种表示方式，有些离心机设置有RPM 和×g 显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：

g=r×1.118×10^-5×rpm²（r为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10^-5×3000²=1006.2（×g）。

微藻细胞核提取试剂盒使用方法：

1、提取液制备：

每500μL冷的提取液A中加入10μL提取液B，混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备提取液，提取液B不可以一次全部加入提取液A。

● 以下步骤使用到的提取液A为此步骤配制好的提取液A。

2、取培养好的微藻样品，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞。

3、用PBS洗涤微藻细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。

4、每300μL体积或300mg湿重微藻细胞沉淀物中加入500μL酵母提取液D，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。

【注】：

● 微藻数量根据实验情况调整，每次的提取液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

● 在处理有些微藻样本时，在试剂D中加入终浓度0.2%的β-巯基乙醇有利于提高微藻细胞的得率。（选作，可不加）

5、在1000×g条件下离心5-10分钟，移除上清，收集微藻沉淀。

6、用PBS洗涤微藻细胞沉淀一次，1000×g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。

7、用提取液A重悬微藻细胞。每300μL细胞（沉淀体积）中加入1ml提取液A。

8、将微藻细胞悬液置振荡器上37℃-55℃振荡24-72小时。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，中间每隔几小时用移液器吹打混匀即可。

● 根据下游细胞核的应用选择合适的温度，最佳温度为55℃，对细胞核各种蛋白活性要求较高的实验可以用较低温度，使用37℃至室温，适当延长处理时间。

● 不同类型的微藻需要处理的时间差异较大。

● 部分细胞壁较厚的细胞类型可能需要处理更长时间。可以延长至72小时以上处理以提高细胞核得率。

9、离心力1000×g离心5分钟，将上清移入另一离心管保存备用，收集细胞沉淀。

10、用PBS洗涤微藻细胞沉淀一次，1000×g离心5分钟，收集细胞，洗涤后尽可能吸干上清。

11、在微藻细胞沉淀中加入1ml试剂C重悬细胞，混匀。

12、将细胞悬液置振荡器上振荡20-30分钟。

【注】：

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有振荡条件也可以不振荡，室温静置，中间每隔几分钟用移液器轻轻吹打混匀即可。

13、离心力2000×g离心5分钟，弃上清，收集沉淀。

14、用PBS洗涤沉淀1-2次。

15、沉淀即为微藻细胞核。将上述微藻细胞核沉淀用适当缓冲液重悬后2-8℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

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