HR8092 真菌膜蛋白提取试剂盒(小型真菌)

真菌膜蛋白提取试剂盒（小型真菌）是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。真菌膜蛋白提取试剂盒（小型真菌）可以从除了大型真菌（蕈菌）以外的各种小型真菌（丝状真菌等）中提取膜蛋白。优化的裂解液配方可以充分释放各种有隔膜菌丝和无隔膜菌丝蛋白以及各种菌丝变态体蛋白中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白...

真菌膜蛋白提取试剂盒(小型真菌)

 

产品编号：HR8092

产品组成：

保存条件：

蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。有效期1年。

【注】：

● 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。

● 蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

真菌膜蛋白提取试剂盒(小型真菌)产品简介：

跨膜蛋白承担各种生物功能，在各种生命活动如细胞的增殖和分化、能量转换、信号转导及物质运输等的发生、发展过程中扮演重要角色。膜蛋白样品的制备需要充分考虑到与下游的胶分析及质谱分析等应用配套，因此膜蛋白样本制备成为一个难以逾越的挑战。

真菌膜蛋白提取试剂盒（小型真菌）是一种快速高效的高产膜蛋白提取试剂盒。真菌膜蛋白提取试剂盒（小型真菌）可以从除了大型真菌（蕈菌）以外的各种小型真菌（丝状真菌等）中提取膜蛋白。优化的裂解液配方可以充分释放各种有隔膜菌丝和无隔膜菌丝蛋白以及各种菌丝变态体蛋白中提取膜蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及膜蛋白制备。提取过程简单方便。

本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。

本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、

Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。

本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。

本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。

本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品HR0389）。

产品特点：

● 使用方便。

● 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。

● 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。

● 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 涡旋混匀器 ● 振荡器 ● 匀浆机/匀浆器 ● PBS ● 蛋白定量试剂盒

真菌膜蛋白提取试剂盒(小型真菌)使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

● 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。

● 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

● 提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

● 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。

● 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。

使用方法：

1、提取液准备：

每500μL冷的提取液A和C中各加入1μL蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后置冰上备用。

【注】：

● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。

● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。

● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。

2、收集50-200mg真菌样本，用PBS洗2次，在4℃，5000×g条件下离心5分钟，小心吸取PBS，尽可能吸干，收集菌体。

【注】：

● 细胞数量根据实验情况调整，每次的裂解液用量并不是一定的，请根据实际情况调整。

● 由于膜蛋白含量较少，需要较多的细胞才能保证得率。在条件允许的情况下，尽可能加大细胞上样量。

3、加入500μL冷的提取液A后用匀浆机/匀浆器充分匀浆。

【注】：

● 也可置于研钵中用液氮研磨，研磨后加入500μL冷的提取液A。

● 没有液氮研磨条件，也可加入500μL 提取液A直接置冰上研磨。

● 提取液A在使用前须一直置于2-8℃条件，否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。

4、在2-8℃低温条件下持续振荡1-2小时。

【注】：

● 此步骤必须在2-8℃条件振荡。

● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。

● 没有2-8℃振荡条件也可以不振荡，置2-8℃静置，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。

5、将提取液在2-8℃下10000×g离心5分钟，取上清。

6、在上清中加入5μL抽提液B，充分混匀。

7、在37℃水浴10分钟。

8、在37℃条件下1000×g离心5分钟。

【注】：

● 此步骤必须37℃条件下离心。

● 如果离心机不可控温，可以不离心，延长上一步骤水浴时间，至溶液逐渐澄清，分层清晰即可。或者在室温条件下离心，缩短离心时间至1分钟。

9、此时溶液分为2层，小心移除上层，留下下层管底部大约50μL液体。

【注】：

● 下层为粘稠状液体。

● 有时还没有分层完全时看上去可能像3层，保留中间的界面层即可。

10、用1-2倍体积冷的膜蛋白溶解液C溶解该溶液，即得膜蛋白样品。

【注】：

● 膜蛋白比较难溶解，不能很快溶解混匀，可以在加入溶解液后稍微吹打混匀，然后置于4℃冰箱静置至溶解。中途用移液器轻轻吹打混匀一次。静置后取出再次用移液器稍微吹打混匀即可。

● 静置直至管底透明胶状物完全溶解。

11、将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

常见问题分析：

● 蛋白浓度低？

膜蛋白丰度较低，需要尽可能真菌上样量。处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。

● 用什么方法定量蛋白？

建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。

● 提取的蛋白具有活性吗？

本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

● 膜蛋白电泳没有条带？

膜蛋白样品通常浓度较低，电泳前一定要进行蛋白定量，以保证电泳是蛋白上样量足够。

膜蛋白提取好后，用溶解液充分溶解后，可以超声处理一下，再进行蛋白定量。

蛋白加Loading buffer后可以不用煮沸，采用50℃保温30分钟。

蛋白Loading buffer中SDS终浓度含量可以提高至3%-10%。

有些样品的膜蛋白含量太低，可以使用丙酮沉淀膜蛋白，再使膜蛋白溶解于上样缓冲液中，一般可以跑出清晰的蛋白条带。

电泳时最后采用低电压低电流电泳。

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