HR8596 细胞质染色试剂盒(FDA,绿色荧光)

细胞质染色试剂FDA是绿色荧光标记的细胞质探针，具有494/521nm的最大激发/发射波长。FDA是一种非荧光疏水性荧光素衍生物，它可以通过细胞膜，因此细胞内酯酶水解产生高荧光产物荧光素的二乙酸酯基团。荧光素分子在具有完整膜的细胞中积累，因此绿色荧光可用作细胞活力的标记。不具有完整细胞膜或活性代谢的细胞可能不会积聚...

细胞质染色试剂盒(FDA,绿色荧光)

 

产品编号：HR8596

产品组成：

储存条件：

-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期6个月。

【注】：

● 染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

细胞质染色试剂盒(FDA,绿色荧光)产品简介：

细胞质染色试剂FDA是绿色荧光标记的细胞质探针，具有494/521nm的最大激发/发射波长。

FDA是一种非荧光疏水性荧光素衍生物，它可以通过细胞膜，因此细胞内酯酶水解产生高荧光产物荧光素的二乙酸酯基团。荧光素分子在具有完整膜的细胞中积累，因此绿色荧光可用作细胞活力的标记。不具有完整细胞膜或活性代谢的细胞可能不会积聚荧光产物，因此不会显示出绿色荧光。

FDA的荧光产物的细胞内保留特性较差，一般2小时保留率低于20%，需要保留特性较好的细胞质染料的可以选择贝博其它货号的产品，例如Calcein AM染料（相关产品HR8629）。

检测方法：

● 流式细胞仪 ● 荧光显微镜 ● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞  ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 荧光显微镜/激光共聚焦 ● PBS缓冲液(pH7.4) ● HBSS（无酚红）

使用注意事项：

● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。

● 染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。

● 以下方法仅供参考，根据需要使用，或者参考文献的使用方法。

● 染色后立即进行分析。

● 本染色液可用于细胞涂片、细胞的检测。

细胞质染色试剂盒(FDA,绿色荧光)使用方法：

1、染色工作液的配制：

根据样本数量，用HBSS或相应的无血清培养基或其他缓冲液将探针FDA进行500-5000倍稀释，配制成染色工作液。

【注】：

● 开始实验前，使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释染料储存液到需要的工作浓度。工作浓度应根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，建议至少在超过10倍范围的浓度下进行测试。一般染色终浓度500-5000倍稀释，1000-2000倍适合大多数细胞样本。

● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 工作液现配现用。

● 若细胞在染色后于不含染料的培养基中孵育，荧光信号会衰减。

2、细胞染色

悬浮细胞染色

1) 用PBS洗涤细胞2次。

【注】：

● 500×g离心5分钟。

2) 加入适量体积的染色工作液重悬细胞，使其密度大约为1×10⁶/mL。

3) 在37℃孵育细胞15～30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 孵育结束，500×g离心5分钟。

5) 移除上清液，再次缓慢加入37℃预热的培养基重悬细胞。

6) 重复（4），（5）步骤两次。

贴壁细胞染色

1) 用PBS洗涤细胞2次。

2) 细胞培养板中或细胞爬片上加入适量体积的染色工作液。

【注】：

● 96 孔细胞培养板每孔加入100μL染色液即可。

3) 37℃孵育细胞15～30分钟，不同的细胞最佳培养时间不同。可以用20分钟作为起始孵育时间，之后优化体系以得到均一的标记结果。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4) 吸干染色工作液，用培养液洗培养板或盖玻片2～3次，每次用预热的培养基覆盖所有细胞，然后吸干培养基。

3、用荧光显微镜或流式细胞仪检测

激发波长为488nm，最大发射波长为521nm。

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