HR9083 内质网染色试剂盒(红色荧光)

内质网染色试剂盒是利用E系列探针进行内质网特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的E04内质网染色探针为红色荧光标记的内质网探针，具有586nm/616nm的激发/发射波长。...

内质网染色试剂盒(红色荧光)

 

产品编号：HR9083

产品组成：

储存条件：

染料-20℃避光保存，避免反复冻融。有效期6个月。

【注】：

● 染料短期2周内可以2-8℃保存。染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。

● 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

内质网染色试剂盒(红色荧光)产品简介：

内质网染色试剂盒是利用E系列探针进行内质网特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的E04内质网染色探针为红色荧光标记的内质网探针，具有586nm/616nm的激发/发射波长。

E系列探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的内质网体进行选择性染色的一类新型荧光染料，该系列探针可以选择性标记内质网。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性内质网上。可有效标记活细胞。一旦内质网被染色后，还能根据后续实验的需求进行固定(醛类固定剂如甲醛)和透化(醛类去污剂如Triton X-100)，探针依然维持在细胞内。

检测方法：

● 荧光显微镜

● 激光共聚焦

样本类型：

● 悬浮细胞

● 贴壁细胞

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 荧光显微镜/激光共聚焦 ● 离心机

● PBS ● 或者HBSS(无酚红)

注意事项：

● E04染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

● 用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。

● 最好使用HBSS缓冲液(含Ca²⁺、Mg²⁺ Hank’s平衡盐溶液)稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

● E04染料具有环境敏感性，工作液条件发生改变E04 会随之出现极性增强、最大荧光波长偏移到更高波长处、量子产量下降等现象。

● 染色后立即进行分析。

● 操作过程中需要尽量避光。

使用方法：

1、染色工作液配制：

根据样本数量，用37℃培养箱预热HBSS或PBS或其他缓冲液将E04荧光染料500倍稀释。配制成染色工作液。(对于后续需要做固定或透化的样本，200倍稀释)

【注】：

● 建议收到产品后，根据使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。

● 开始实验前，使用HBSS或培养基缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度，一般染色终浓度为试剂盒中染料母液的500倍稀释。

● 为了降低过度加载染料导致的潜在背景和内质网毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。另外，浓度过高也可能造成非特异性染色，对其他细胞结构进行染色。

● 工作液现配现用。

● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。

● 使用含Ca²⁺、Mg²⁺ Hank’s平衡盐溶液(HBSS/Ca/Mg)稀释该探针进行染色，可得到最佳实验结果。

● 以下实验方案经牛肺动脉内皮细胞优化，且已被其他常规细胞系验证。但不同细胞类型其最佳使用条件不同，还需用户根据该方案进行进一步优化染色浓度和时间。

2、细胞染色

内质网染色试剂盒(红色荧光)2.1 对于贴壁细胞

1)培养皿/培养板准备细胞样本。

2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，用HBSS缓冲液洗涤细胞，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育15分钟～40分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。

【注】：

● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。

3)利用新鲜培养基替换上述染色液。

【注】：

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

4)荧光显微镜(含合适滤片)或激光共聚焦显微镜下观察。或者进行后续的固定步骤。

激发/发射波长为586/616nm。

2.2 对于悬浮细胞

1)用HBSS洗涤细胞。

2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育15分钟～40分钟(具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。

3)离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。

4)置于荧光镜下观察。或激光共聚焦显微镜检测。激发/发射波长为586/616nm。或者进行后续的固定步骤。

【注】：

● 对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。

● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻片或盖玻片。

● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

● 已染色细胞用醛固定后，仅部分E04探针留在细胞内，荧光信号会有衰减。

常见问题分析：

● 可以对细胞进行固定吗？

已染色细胞固定后，仅部分荧光探针留在细胞内，荧光信号会有部分衰减。

 

● 固定细胞的方法？

染色后清洗，小心吸走清洗液。换用新鲜配制且预热的含4%甲醛的缓冲液或培养液进行细胞固定。用4%甲醛于37℃固定细胞2min。 细胞固定后，可用合适缓冲液进行清洗，每次5min，共2次。清洗后可对细胞进行后续封片、镜检或进一步染色。

● 可以对细胞进行透化处理吗？

不建议对细胞进行透化处理，因为经Triton X-100或其它透化剂透化后，细胞内将无荧光信号保留。

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