SYA504 小反刍兽疫病毒
产品简介
小反刍兽疫病毒(PPRV)单重荧光PCR检测试剂盒是高品质的动物疫病PCR检测试剂盒产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于科研试验,我公司专注于动物疫病PCR检测试剂盒产品的研发、生产和供应,为您提供的小反刍兽疫病毒(PPRV)单重荧光PCR检测试剂盒质量可靠,批间差小,且价格公道,热切盼望您选购我们的产品。...
产品详细介绍
特别提示:包括小反刍兽疫病毒(PPRV)单重荧光PCR检测试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:小反刍兽疫病毒(PPRV)单重荧光PCR检测试剂盒
产品货号:SYA504
产品规格:48次/盒
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名称:新城疫病毒(NDV)通用型单重荧光PCR检测试剂盒
货号:SYA344
规格:48次/盒|96次/盒
一、简介:
新城疫病毒实时荧光qRT-PCR检测试剂是按照美国农业部(USDA)的检测标准而制备的商业化检测试剂盒。本试剂盒为中的探针报告基团为6-FAM,淬灭基团为MGB。
二、用途:
本试剂盒适用于检测禽类喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各种组织样品、尿囊液及细胞培养液等。可用于新城疫毒株感染的辅助诊断、监测及流行病学调查,其检测结果仅供参考。
三、试剂盒组成:(50T/Kit)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(NDV-qRT-PCR MIX) 1管 700μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(NDV-PTC) 1 管 50μL/管
四、储存条件及有效期
本试剂盒于-18℃以下保存,有效期为6个月。
五、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列,Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。
六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照标准《新城疫诊断技术》(GB/T 16550-2008)和《新城疫检疫技术规范》(SN/T 0764-2011)进行样品的采集。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取,也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
(1) 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管,做好标识。
(2) 每管加入600 µL裂解液,分别加入被检样本200 µL,再加入200 µL氯fǎng,混匀器上振荡混匀5 s,于4℃ 12000r 离心15 min。
(3) 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管,加入-20℃预冷400µL异丙醇,吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中,避免吸出中间层,颠倒混匀。
(4) 于4℃ 12000 r离心15min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体;加入600µL 75%预冷乙醇,洗涤。
(5) 于4℃ 12000 r离心10min,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体。室温干燥5 min~10 min。
(6) 加入10µL无核酸降解酶的水,溶解管底的RNA,5000 r离心5 s,冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃冰箱。
注:阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取),直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高,建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。
七、检测步骤:
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 19 µL N×19 µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 20 µL N×20 µL
计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入20μL,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(NDV -PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Trans
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR 扩增 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。
八、结果分析:
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整,以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
(1) 阴性对照(NTC):不应产生任何的扩增曲线。
(2) 阳性对照(NDV-PTC):均产生扩增曲线。
(3) 以上条件应同时满足 ,否则,此次试验视为无效。
8.3 结果判定
(1) 在试验成立的条件下,Ct值≤35的样本为阳性,表明NDV核酸阳性。
(2) Ct值显示为无的样本为阴性样本,表明NDV核酸阴性。
(3) 如果35<Ct值≤40,判为可疑样品。对于可疑样品,先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线,则为可疑阳性,否则判为阴性。
(4) 对于可疑阳性样品,重新抽提核酸,再次进行NDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线,判为样本阳性,表明NDV核酸阳性;否则判为样本阴性。
九、注意事项:
(1) 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
(2) 所有使用的离心管zuì好高压灭菌,而且必须不含RNA酶。
(3) PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等),防止实验室污染。
(4) 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行,以免污染。
(5) 试剂盒里所有物品应视为污染物对待,按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。
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