YT273 双萤光素酶报告基因检测试剂盒

北京百奥莱博供应的双萤光素酶试剂盒用于科研目的，我公司的双萤光素酶报告基因检测试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括双萤光素酶报告基因检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：双萤光素酶报告基因检测试剂盒
英文名称：Dual Luciferase Reporter Gene Assay Kit
产品货号：YT273
产品规格：100次|1000次

本试剂盒是先以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶，后以肠腔素为底物来检测海肾萤光素酶，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。

试剂盒组分：

报告基因细胞裂解液	60ml
萤火虫萤光素酶检测试剂	10ml
海肾萤光素酶检测缓冲液	10ml
海肾萤光素酶检测底物(100×)	100μl

萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的过程中，会发出生物萤光。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine氧化成coelenteramide，在coelenterazine氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪或液闪测定仪进行测定。本试剂盒的检测原理参考下图。


双萤光素酶的检测原理图。

通过萤光素酶和其底物这一生物发光体系，可以非常灵敏、地检测基因的表达。通常把感兴趣
基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游，或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等，构建成报告基因(reporter gene)质粒。然后转染细胞，用适当药物等处理细胞后裂解细胞，测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。Renilla luciferase相对更多地被用作转染效率的内参，以消除细胞数量和转染效率的差异。萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的zuì强发光波长为560nm。海肾萤光素酶催化coelenterazine发光的zuì强发光波长为465nm。

注意事项：
1. 加入海肾萤光素酶检测工作液后对于上一步骤中的萤火虫萤光素酶的抑制可以达到99%以上。但总会残留微量活性，因此，宜在转染时把海肾萤光素酶的表达量控制在其RLU读数高于萤火虫萤光素酶RLU读数的10%。海肾萤光素酶的读数高于萤火虫萤光素酶的读数是完全可以的，通常不会有明显的负面影响。
2. 为取得zuì佳测定效果，在用单管的化学发光仪测定时，样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同的时间内，例如30秒内；使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时，宜先把样品全部加好，然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
3. 由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
4. 为保证萤光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时
间暴露于室温。经测试，反复冻融三次，对测定结果无明显影响。
5. 样品和测定试剂混合后，必须等待1-2秒，再进行测定。测定时间通常为10秒，根据情况也可以测定更长或更短时间，但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
6. 海肾萤光素酶检测底物(100×) 配制在无水乙醇中。由于无水乙醇容易挥发，有时会在初次使用时发现体积明显小于100μl的情况，此时用无水乙醇把体积补足至100μl，并混匀后即可使用。
7. 海肾萤光素酶检测工作液宜配制后立即使用。如不能立即使用，-20℃可以保存一周。随着保存时间的延长检测效果会不断下降，因此不可配制成工作液后长期保存。

储存条件：-20℃，有效期一年。

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名称：双荧光素酶报告基因检测试剂盒
货号：KFS303
规格：100T
双萤光素酶报告基因检测试剂盒，是先以萤光素(luciferin)为底物来检测萤火虫萤光素酶(Firefly luciferase)，后以肠腔素(coelenterazine)为底物来检测海肾萤光素酶(Renilla luciferase)，并且在后续加入海肾萤光素酶底物时，同时加入抑制萤火虫荧光素酶催化luciferin 发光的物质，使后续检测仅仅检测到海肾萤光素酶的活性，实现双萤光素酶报告基因检测。萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD 的蛋白，在ATP、镁离子和氧气存在的条件下，可以催化luciferin 氧化成oxyluciferin，在luciferin 氧化的过程中，会发出生物萤光(bioluminescence)。海肾萤光素酶是一种分子量约为36kD 的蛋白，在氧气存在的条件下，可以催化coelenterazine 氧化成coelenteramide，在coelenterazine 氧化的过程中也会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪(luminometer)或液闪测定仪进行测定。

注意事项
1.无菌操作。
2.荧光染料操作中注意避光进行。
3.由于温度对酶反应有影响，所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
4.为保证荧光素酶检测试剂的稳定性，可以采取适当分装后避光保存的方法，以避免反复冻融和长时间暴露于室温。
5.萤火虫荧光素酶检测试剂、Renilla 荧光素酶检测试剂zuì好现用现配。
6.细胞裂解液及裂解时间可根据细胞量适当增加、延长。

名称：LXR-Luc荧光素酶报告基因质粒
货号：SY0074
规格：1μg
LXR荧光素酶报告基因（报告基因质粒）（LXR luciferase reporter plasimd）是用于检测LXRα转录活性水平为目的的报告基因。LXRα(liver X receptor α)转录因子核受体家族的成员之一。LXRα仅在肝脏、肾脏、小肠、肺、肾上腺和巨噬细胞中表达。LXRs(liver X receptor)参与机体多种生理活动的调节，包括胆固醇的代谢、脂肪的形成、糖原异生和炎症等过程。

LXR报告基因主要用于检测细胞中LXRα的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

pGMLXRα-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个LXRα结合位点，可以高灵敏度地检测LXRα的激活水平。同时，对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变，增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小，使得LXR报告基因质粒更易于转染。

质粒图谱



注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途，也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康，实验操作时请穿实验服和带一次性手套。

使用说明
1.pGMLXRα-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
2.LXRα的激活剂，可作为LXR报告基因的阳性对照。

储存条件：-20℃。

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货号	名称	规格
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SY0061	STAT3萤火虫荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0075	KLF4-Luc荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0080	HNF4-Luc荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0098	p53-Luc荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0124	ELK1-Luc荧光素酶报告基因质粒	1μg
SY0125	ERRα-Luc荧光素酶报告基因质粒	1μg

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