WE0101 Taq DNA Polymera
产品简介
北京百奥莱博供应的Taq DNA Polymerase用于科研目的,我公司的Taq DNA Polymerase品质上佳,经过多年的开发生产,已然非常成熟,欢迎广大新老客户订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括Taq DNA Polymerase在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:Taq DNA Polymerase
英文名称:Taq DNA Polymerase
产品货号:WE0101
产品规格:500U|2500U|10000U
Taq DNA Polymerase是通过大肠杆菌表达纯化的重组酶。其基因来源于Thermus aquaticus polymerase。该蛋白分子量为94 kDa,具有5"→3"DNA聚合酶活性和5"→3"外切核酸酶活性,无3"→5"外切核酸酶活性,扩增得到的PCR产物3"端附有一个“A”碱基,因此可直接用于T/A克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高的特点,主要适用于PCR法扩增DNA片段、DNA序列测定等实验。
产品组成:
组份 | 500 U | 2500 U | 10000 U |
Taq DNA Polymerase(5 U/μl) | 100μl | 5×100μl | 2×1ml |
10×PCR Buffer | 1.8ml | 5×1.8ml | 8×5ml |
活性定义:用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物,在74℃,30分钟内,将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。
质量控制:
1、经过多次柱纯化,SDS-PAGE检测其纯度大于99%;
2、经检测无外源核酸酶活性;
3、PCR方法检测无宿主残余DNA;
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因;
5、室温存放一个月,无明显活性改变。
使用方法:
以下举例为以人基因组DNA为模板,扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件,实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系:
试剂 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
10×PCR Buffer | 5μl | 1× |
dNTP Mix,10 mM each | 1μl | 200μM each |
Forward Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Reverse Primer,10μM | 2μl | 0.4μM |
Template DNA | <0.5μg | <0.5μg/50μl |
Taq DNA Polymerase | 0.25-0.5μl | 1.25-2.5 U/50μl |
ddH2O | up to 50μl |
注意:引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度,由此优化反应体系。
2、PCR反应条件:
步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性 | 94℃ | 2min | |
变性 | 94℃ | 30s | 25-35个循环 |
退火 | 55-65℃ | 30s | |
延伸 | 72℃ | 30s | |
终延伸 | 72℃ | 2min |
注意:
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃,无法得到理想的扩增效率时,适当降低退火温度;发生非特异性反应时,提高退火温度,由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定,本产品Taq DNA Polymerase的扩增效率为2 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少,扩增量不足;如果循环次数太多,错配机率会增加,非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。
储存条件:-20℃,避免反复冻融。
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