MT0030 LAMP试剂盒(含染料)

LAMP试剂盒(含染料)是高品质的核酸扩增(PCR)产品，由北京百奥莱博供应，本产品仅用于生物化学研究方面，本品质量稳定，价位合理，需要LAMP试剂盒(含染料)等核酸扩增(PCR)产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括LAMP试剂盒(含染料)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：LAMP试剂盒(含染料)
英文名称：Loop-mediated isothermal amplification Kit(With visible light dye)
产品货号：MT0030
产品规格：50T|200T

LAMP(环介导等温扩增技术)是一种核酸扩增技术，采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物，依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性，在30～60分钟内DNA扩增可达10⁹～10¹⁰倍。本试剂盒含有可见光染料，阳性扩增样品的颜色为天蓝色，阴性扩增为紫罗兰色。购买本试剂盒，我们可以为客户设计引物，需要设计引物的请发Email咨询。

产品特点：
1．检测方便：变色反应，颜色变化明显，肉眼即可观察。
2．操作简单：一步反应30分钟即可完成。
3．特异性高：六条特异性引物，保证了产物的特异性和检测的可靠性。
4．仪器简单：只需维持恒温的水浴锅。
5．灵敏度高：能从低拷贝中扩增靶基因。
6．应用广泛：广泛适用于微生物致病菌检测和疫病检测。

产品组成：

组分	50T	200T
10×可见光染料	150μl	1ml
10×LAMP Buffer	1ml	1ml
100 mM MgSO4	500μl	500μl
10 mM dNTP Mixture	500μl	1ml
Bst DNA Polymerase 2.0	50μl	200μl

注意：10×LAMP Buffer中的Mg2+浓度为60 mM。

保存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期3年。

反应实例：

应用本试剂盒和6条引物扩增HHV-6 DNA，产物分别可见光染料显色观察和电泳法检测

使用方法：
1．按以下组分配置反应混合液：

加入物	加入量
10×LAMP Buffer	2.5μl
10×可见光染料	2.5μl
10mM dNTP Mixture	2μl
模板 DNA	Xμl
*10×LAMP Primer Mix	2.5μl
Bst DNA Polymerase 2.0	1μl
ddH2O	Up to 25μl

*10×LAMP Primer Mix：FIP/BIP 16μM each，Loop F/R 8μM each，F3/B3 2μM each
2．反应体系配好后，充分混匀并短暂离心，65℃ 30分钟。

注意事项：
1．为了减少交叉污染，请分区操作（试剂和模板DNA的配置操作zuì好在不同区域中进行）。
2．实验时，所需模板量取决与样品类型（0.1ng～100ng），可行预实验确定模板量。
3．10×LAMP Buffer中含有60 mM MgSO4，反应体系中Mg2+终浓度为6 mM。通常无需添加即可，必要情况下可提高到10～16mM。
4．各区物品均为专用，不可交叉使用，防止污染。
5．实验过程中应穿工作服，带手套，建议使用带滤芯的一次性吸头。


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BTN131212 PCR Mix染料 10mL
BTN130815 taq酶抗体 500U
BTN130911 miRNA cDNA链合成试剂盒 25次
YT378 2×PCR Master Mix（含Taq酶，buffer，dNTP） 400次
RFT105 Oligo(dT)18 Primer 100μl
SY0029 2×PCR Plus Master Mix(不含染料) 5×1ml
JN0041 2×Ultra Taq PCR MasterMix 0.5ml×5

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名称：cDNA链合成试剂盒(逆转录试剂盒)(RT试剂盒)
货号：BTN60906
规格：50次
本试剂盒提供合成cDNA链所需要的全部试剂。其原理是用突变的莫洛尼氏鼠白血病病毒反转录酶(M-MuLV RT)合成mRNA的全长cDNA拷贝。

产品特点：
1. 使用突变的反转录酶，内源RNase H活性低。
2. zuì长可合成13Kb的cDNA。
3.可以使用oligo-dT、随机引物和RNA 专一性引物三种引物(前两种本试剂盒提供)。
4. 总RNA、poly(A)+RNA或特殊RNA 均可作为模板。
5.可用于cDNA文库构建、RT-PCR、探针标记等。

试剂盒组成：

成分	规格
MMLV(含RI)	100μl
RT Buffer(含dNTP)	300μl
Oligo(dT)18引物(0.5μg/μL)	50μl
Random Primer(0.2μg/μL)	50μl
RNase-free水	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一：合成PCR用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系：

RNA 模板
总RNA	100-500ng
或poly(A)mRNA	10-500ng
或专一的RNA	0.01pg-500ng
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。

引物

Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA 模板专一性引物	15-20 pmol
注意：随机引物与RNA 模板的比例跟cDNA 合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA 模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟。
5. 加入2μL MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，然后放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR 模板使用，不需要纯化。

二：合成建文库用的1st-strand cDNA
1. 按下表配制RT反应体系:

RNA模板
poly(A)mRNA	1μg
或专一的RNA	0.5-1μg
注意：RNA样品不能含有基因组DNA污染。
引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或RNA模板专一性引物	100 pmol
注意：随机引物于RNA模板的比例跟cDNA合成的平均长度成反比。
RNase-free水	补水到13μL

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μl RT Buffer(含dNTP)。
4. 37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则改成25℃ 5分钟)。
5. 加入2μl MMLV逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。此步为RT反应。
7. 70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃长期保存。

三：用对照模板合成cDNA(需要用同位素，需要对照的客户需要单独跟我司联系)
1. 按下表配制RT反应体系:

对照RNA模板(0.5μg/μL)	2μl 引物
Oligo(dT)18(0.5μg/μL)	1μl
或随机引物(0.2μg/μL)	1μl
或对照专用引物	2μl
RNase-free水	补水到13μl

2. 70℃保温5分钟后立即冰浴。
3. 再加入5μL RT Buffer(含标记dNTP，本试剂不提供)。
4. 37℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃。
5. 加入2μL MMLV 逆转录酶(含RI)，反应终体积为20μL。
6. 42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7. 加1μL 0.5M EDTA，放置在冰上待用。
8.电泳检测。合成的cDNA的量一般有加入RNA总量的50%以上，电泳一般能出现1.1Kb的片段(如果使用随机引物，将出现多个小片段)。

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