JN0109 pBalbGST-Tev质粒

我公司致力于为客户提供高纯度、低成本的活性重组蛋白，包括pBalbGST-Tev质粒在内的各类受体、细胞因子、生长因子、转录因子、激素、酶、毒性蛋白、病毒抗原等。...

特别提示：包括pBalbGST-Tev质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pBalbGST-Tev质粒
产品货号：JN0109
产品规格：20次(1μg)

  本质粒以XhoI线性化方式提供，请配合BalbRec PCR产物一步无缝克隆试剂盒使用（CatNo. JN0001）。
  GST是实验室中zuì常用的融合标签之一，能够促进目标蛋白质的溶解性和正确折叠。Thormbin作为常用的切除GST标签的蛋白酶，常常出现在目标蛋白中，从而限制了其应用。pBalbGST-Tev质粒在 Thombin位点后引入了TEV Protease切点，大的增加了标签切除的特异性。
  目的基因扩增按常规方法设计引物后，在5′端引物前添加以下序列：CTC TAC TTC CAA GGT； 3′端引物前添加：GTC ACG ATG CGG CCG。3′端引物需要加入终止密码子。

产品组成：

组份	规格
pBalbGST-TEV	1ug
BalbRec 重组酶	20μl
10×BalbRec 重组缓冲液	50μl
Control Insert（50 ng/μl）	10μl
TEV protease	100U
附赠
2×pfu MasterMix (快速上样型)	1ml
2×Fast Taq MasterMix(快速上样型)	1ml
DNA Ladder 2000 Plus	100μl

图例一）：pBalbGST-TEV载体表达的Human CBS Recombinant Protein纯化电泳图：
Lane 1: Load sample
Lane 2: Flowthrough
Lane 3: Elution by 10mM GSH
Lane 4: Elution by 10mM GSH
Lane 5: Elution-6M Gua-HCl
Lane 6: 蛋白Marker


图例二）：pBalbGST-TEV载体表达的Human CBS Recombinant Protein初步纯化后，30℃下，经不同量的TEV Protease酶切2小时：
Lane 1: No rTEV
Lane 2: 100 units/mg
Lane 3: 400 units/mg
Lane 4: 800 units/mg
Lane 5: Molecular weight marker





质量控制：pBalbGST-TEV线性化载体经过严格的自连测试以及连接效率测试。

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名称：大肠杆菌M15化学感受态细胞
货号：BTN140429
规格：0.1mL*10
 本产品是采用大肠杆菌M15菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。使用pUC19质粒检测，本产品转化效率可达107。本产品具有卡那霉素抗性。
 菌株基因型为：lac ara gal mtl recA+ uvr+ [pREP4 lacI kanaR]。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。

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