MT0010 TRIzol试剂

北京百奥莱博供应的TRIzol试剂用于生化实验研究等领域，TRIzol试剂是我司众多优质RNA提取纯化之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括TRIzol试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TRIzol试剂
英文名称：TRIzol Reagent
产品货号：MT0010
产品规格：100ml

TRIzol Reagent是一种可用于提取动植物和细菌来源的组织或细胞RNA的制品。样本在进行匀浆的过程中，TRIzol Reagent能够充分破坏细胞，裂解细胞内含物，同时可抑制RNA酶的活性，从而保持RNA的完整性。TRIzol Reagent具有很强的广谱性，可以适用于各种样品的总RNA提取，提取过程方便快速，整个操作在一小时内便可以完成。该试剂可用于小量样品（20-100mg组织、1×10⁶细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>10⁷细胞）；对人、动物、植物组织、细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot、Dot blot、ployA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆。

样本量及 RNA 产量：

样本类型	样本量	产量
白细胞	1×106个	10～20μg
植物材料	25mg	10～20μg
细胞	1×106个	8～15μg
肌肉/脑等组织	50mg	10～25μg
肝脏组织	50mg	100～300μg

储存：2-8℃避光保存，可保存 2 年。
注意：该试剂含有强变性剂，请勿直接于皮肤接触或吞咽，若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服，戴手套。
自备试剂：氯fǎng，异丙醇，70％乙醇（DEPC 水配置），RNase-Free H2O。

操作方法：

一、实验前准备：
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA 分解酶的污染。因此，在实验中必须采取以下措施：戴一次性干净手套；使用RNA 操作专用实验台；在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA 分解酶的污染。
注意事项：
1. 尽量使用一次性塑料器皿，若用玻璃器皿，应在使用前用0.1%DEPC 水溶液在37℃处理 12h，然后在120℃高压灭30分钟 以除去残留的DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂，须使用干热灭菌（180℃，60min）或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装（也可以使用RNA 实验用的一次性塑料容器)，使用的无菌水须用0.1%的DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用，避免混用后交叉污染。

二、实验操作：
TRIzol Reagent的使用量情况如下：

10cm2贴壁培养细胞	1ml
1×106～10×106悬浮培养细胞	1ml
50-100mg的普通组织样品（肌肉等）	1ml
30-50mg的特殊组织样品（肝、脾等）	1-2ml
30-50mg的植物材料	1ml
白细胞（1×106）	1ml

TRIzol 使用方法：

	贴壁细胞	悬浮细胞、酵母、细菌	动植物组织
1.样品预处理	每 10 cm2 生长的培养细胞中倒出培 养液，用PBS 清洗一次，尽可能移 除多余的溶液。	将悬浮培养细胞连同培养液一起 倒入离心管中，8,000 rpm离心2分钟，弃上清，加入50μl无菌水 重悬细胞至无明显沉淀。	将样品转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加 入液氮，直至研磨成粉末状。
2.加入TRIzol	加入1ml TRIzol，使裂解液均匀分布 于细胞表面，然后使用移液枪吹打细 胞使其脱落。将细胞的裂解液转移至 1.5ml EP管中。	加入1ml TRIzol。	将研磨好的组织加入到装有 1ml TRIzol的1.5ml EP管中。
3.裂解样品	加入TRIzol 后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀，无块状物。室温静置 5分钟，使核酸蛋白 复合物完全分离。
4.加氯fǎng	加入200μl 氯fǎng，手腕用力振荡 15s，室温放置 2分钟。
5.离心分层	13000rpm离心10分钟，吸取600μl无色上清至新的1.5EP管中。
6.加异丙醇	向上述600μl上清液中加入600μl 异丙醇，手腕用力上下颠倒数次，于-20℃放置 5分钟。
7.离心沉淀总RNA	13000rpm离心10分钟，小心倒掉上清，留取底部总RNA 沉淀。
8.漂洗总RNA	向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇，上下颠倒数次，13000rpm离心5分钟，小心倒掉上清，留取底部 RNA 沉淀。
9.重复漂洗一次	重复步骤8再洗涤一次。
10.挥发残留乙醇	倒掉洗液，再次短离心10s 后，用10μl Tip 头吸干剩余的洗液，置于室温使乙醇挥发干净（～20分钟）。
11.溶解总RNA	每管加入20～100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解总RNA。

常见问题分析：
1．抽提率低。
  可能原因：
  a. 样品裂解或匀浆处理不彻底；
  b. RNA 沉淀未完全溶解。
2．A260/A280＜1.65。
  可能原因：
  a. 检测吸光度时，RNA 样品没有溶于水，而溶于了TE中；
  b．样品匀浆时加的组织量过多；
  c．分层后，吸取上清液不足 500μl；
  d．吸取水相时混入了有机相。
3．DNA 污染过多。
  可能原因：
  a. 样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多；
  b. 样品中含有有机溶剂。
  解决方法：使用该试剂通常基因组DNA 污染含量<0.1ng/μl，如需要彻底去除DNA的污染，请使用Rnase-Free DNase I（货号：MT0090）消化去除基因组DNA 污染。如使用cDNA 链反转录试剂盒(含基因组去除剂)（货号：MT0015）则无需提前消化去除基因组DNA 污染，该试剂盒中包含了去除基因组DNA 污染的试剂。

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货号	名称	规格
BTN3060	非冻型组织RNA保存液	250mL
BTN160906	植物RNA提取试剂盒(无酚无氯fǎng柱式提取)	50次
BTN120503	藻类RNA柱式提取试剂盒	50次
BTN130847	柱式白色念球菌RNA提取试剂盒	50次
BTN3110	氧钒核糖核苷复合物(RVC/VRC)	10mL
BTN60201	非酶DNA清除剂(＞200nt)	1.5mL
BTN70801	非酶DNA清除剂-2(＜200nt)	15次

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名称：动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
货号：BTN71201
规格：50次
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 高于进口的柱式RNA提取产品。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯fǎng(1mL溶液A需0.2mL 氯fǎng)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA zuì好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议zuì好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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