HR8198 酵母核提取试剂盒

酵母核提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多酵母核提取试剂盒等亚细胞结构研究产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括酵母核提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：酵母核提取试剂盒
英文名称：Yeast nuclear extraction kit
产品货号：HR8198
产品规格：50T|100T

酵母核提取试剂盒适用于从各种酵母中提取完整的具有活性的细胞核。提取过程简单方便。制备的酵母核纯度高，保持天然活性，少交叉污染。
我公司可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：2-8℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器：
●离心机● 振荡器● 涡旋混匀器● 移液器●冰箱●冰盒
试剂：
● PBS (pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1×))(phosphate buffer saline/Dμlbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)
耗材：
●离心管● 吸头

使用方法：

使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

1．酵母培养物，在4℃，1000g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
2．用PBS 洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
【注】：
●在1000g离心5分钟。
3．每100μl酵母沉淀物中加入200μl酵母核蛋白提取液A，混匀后，在30℃条件下保温15分钟。
4．在1000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集酵母沉淀。
5．用500μlPBS 洗涤酵母一次，离心收集菌体。
【注】：
●在1000g离心5分钟。
6．酵母沉淀物中加入300-500μl酵母蛋白提取液B，充分混匀。
【注】：
● 根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2-5倍均可。
● 按酵母菌体体积每100μl或100mg 湿重菌体加入300-500μl提取液。
7．在37℃或室温条件下轻微振荡45-60分钟。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
8．在1000g条件下离心5-10分钟，收集沉淀，弃上清。
9．用500μl PBS洗涤沉淀。离心收集沉淀。
【注】：
●在1000g，离心10分钟。
10．沉淀中加入400μl 酵母核提取液C，高速涡旋15秒混匀，然后在振荡器上振荡15-30分钟。
【注】：
● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
11．再次高速涡旋振荡5秒，然后在4℃，1000g条件下离心10分钟，弃上清，沉淀即为酵母细胞核。
12．用适量试剂D重悬酵母核，置4℃保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 也可根据需要用其他缓冲液保存。

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名称：植物叶绿体纯化试剂盒
货号：BTN120308
规格：15次
叶绿体是重要的，负责植物光合作用的细胞器，很多重要的特性(如雄性不育)也跟叶绿体相关，所以叶绿体是研究植物生理和母系遗传的重要材料。对植物叶绿体进行生化，遗传和分子生物学研究都需要进行叶绿体纯化。本产品就是基于密度梯度离心的，专门用于从植物叶片中纯化完整叶绿体的试剂盒。

产品特点：
1．即用型试剂盒，用户不需要单独配制各种溶液。
2．提供AB两种选择，A型用于叶绿体粗提，所得叶绿体含少量其他细胞器污染，可用于后续的SDS-PAGE，Western，ELSIA和蛋白组分析。B型用于叶绿体精提，所得叶绿体完整，可用于后续的光合作用，电子链和磷酸化，跨膜转运，体外叶绿体蛋白合成，蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜，基质，类囊体，叶绿体DNA和叶绿体RNA纯化。
3．本产品足够15次提取，每次可处理30g叶片，能得到5mg左右叶绿体。
4．已经成功用于菠菜，大豆，莴笋，白菜，烟草和甜菜等植物，还可用于更多植物(可能需要优化条件)。


试剂盒组成：

成分	规格
溶液A成分一	250ml×2
溶液A成分二(干粉)	3g
溶液B	60ml
带柄尼龙滤膜	1个
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，保存期限一年。

使用方法：
注意：叶绿体对温度高度敏感，所以整个操作必须在冰上或者在冷室进行，所用器皿和溶液均需要在4℃预冷。离心时一定要在4℃进行，离心力以g而不是rpm计算。如果需要研究叶绿体的功能，提取过程还需要在昏暗的光线条件下进行。

1．实验前1-2天将植物放在暗室培养以减少叶绿体中淀粉颗粒的形成，否则离心时这些颗粒很容易使叶绿体破裂。叶片在实验前需先用自来水洗净，再用蒸馏水淋洗，去掉多余水分。如果叶片采集后不能立即处理，则保存时需要保持叶片湿润，即使如此，叶片的放置时间也不能超过一天。
2．新鲜(实验当天)制备溶液A：将自备的去离子水与溶液A成分一按4：1的比例混合，然后在混合液中加入溶液A成分二干粉到终浓度0.1%(每100mL中加入0.1g干粉)，摇晃溶解后所得溶液即为溶液A，冰上预冷待用。一次实验(从30 g叶片提取叶绿体)所需要的溶液A体积跟材料不同而不同。
3．新鲜采集植物叶片，快速去除叶脉并将叶片剪成1-3cm2大小的碎片并浸泡在适量的预冷的溶液A中(每克叶片加4mL溶液A，但对烟草和大豆，每克叶片需要加6mL溶液A)。
4．将浸泡了叶片的溶液A转移到Waring匀浆机(即家用制备果汁的匀浆机)中，低速匀浆10秒，避免起泡沫。用玻璃棒把液面的碎片按入匀浆机底部后，再低速匀浆10秒。注意：除Waring匀浆机外，还可以选择Dounce玻璃匀浆器，Polytron匀浆机和研磨(加玻璃珠)等裂解细胞的方法，但这些方法的单次处理量都比较小，需要将样品分成很多小份单独匀浆，然后再汇集。
5．用带柄尼龙滤膜过滤匀浆液，可先将滤液收集到预冷的200mL量筒中，再等分到4个预冷的50mL的塑料离心管中(每个管中的滤液不要超过35mL)。带柄尼龙滤膜后可反复使用。
6．在水平转子离心机上4℃ 200g离心3分钟(对菠菜，白菜和莴笋材料)或400g离心1分钟(对甜菜材料)，白色沉淀为未破裂的细胞或细胞核。
7．将上清液(含叶绿体)转移到一个新的、预冷的50mL塑料离心管中。
8．在水平转子离心机上4℃ 1000g离心7分钟，小心弃上清，沉淀含叶绿体，呈浅绿色。
9．在沉淀中加入1.5mL预冷的溶液A，手弹离心管底部使叶绿体重悬。注意：重悬时zuì好避免溶液起泡，也不要用枪头吹打，否则叶绿体容易破裂。沉淀下有白色淀粉属于正常现象，但重悬叶绿体时避免将白色淀粉重悬。
10．将4管叶绿体重悬液汇集(共约6mL)。此溶液为叶绿体粗提产物，可直接用于后续的SDS-PAGE，Western，ELISA和蛋白组分析。如果需要以之为材料精提叶绿体，就需要将破裂的叶绿体和完整的叶绿体分开，根据植物的不同，可选用下述两种密度梯度离心法之一进行分离。
11．单浓度分离法(适合菠菜，白菜和莴笋等材料)：
a)在50mL塑料离心管中先加入6mL溶液A成分一和4mL溶液B，充分混合均匀。
b)在其液面上小心铺上第11步汇集得到的约6mL叶绿体重悬液。
c)在水平转子离心机上4℃ 1000g离心8分钟，zuì上层的绿色带含破碎的叶绿体，线粒体和核糖体等，管底的绿色沉淀为完整的叶绿体。
d)小心将上清倒出后，在叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一，手指轻弹管底使之重悬。
e)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存。可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用，否则非常容易失去活性。
12．双浓度分离法(适合烟草，甜菜和大豆等材料)：
a)在14mL塑料离心管中先加入0.5mL溶液A和2mL溶液B，充分混合均匀，得密度梯度重液。
b)在另一试管中将3mL溶液A和2mL溶液B充分混合均匀，得密度梯度轻液。
c)将密度梯度轻液小心铺在密度梯度重液之上，然后将第10步汇集得到的叶绿体重悬液中的4mL(还剩下2mL)小心铺在密度梯度轻液之上。
d)在水平转子离心机上4℃ 3200g离心15分钟，zuì上层绿色带含破碎的叶绿体、线粒体和核糖体等，重液和轻液间的绿色带为完整叶绿体。
e)用广口吸管小心将重液和轻液之间的绿色带(叶绿体)转移到新的离心管中，加入三倍体积的预冷的溶液A成分一，轻柔混匀。
f)在水平转子离心机上4℃ 1700g离心1分钟，小心将上清倒出后，在绿色的叶绿体沉淀中加入预冷的0.5mL溶液A成分一，手指轻弹管底使之叶绿体重悬。
g)将叶绿体重悬液转移到1.5mL离心管中并避光保存，也可在相差显微镜下检查叶绿体完整性。叶绿体必须尽快使用，否则非常容易失去活性。所得精提叶绿体可用于后续的光合作用，电子链和磷酸化，跨膜转运，体外叶绿体蛋白合成，蛋白定位等研究。还可用于的叶绿体膜，基质，类囊体，叶绿体DNA和叶绿体RNA纯化。

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