BTN11-3260 沙门氏菌荧光定量PCR检测试剂盒

沙门氏菌荧光定量PCR检测试剂盒的品牌是百奥莱博，是优质的细菌PCR检测试剂盒产品，本制品用于科研试验，本品质量稳定，价位合理，需要沙门氏菌荧光定量PCR检测试剂盒等细菌PCR检测试剂盒产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括沙门氏菌荧光定量PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：沙门氏菌荧光定量PCR检测试剂盒
英文名称：Salmonella qPCR Kit 使
产品货号：BTN11-3260
产品规格：50次

本试剂盒就是针对沙门氏菌肠毒素stn基因设计特异性引物，利用实时荧光定量 PCR技术开发的沙门氏菌检测试剂盒，它通过荧光染料实时显示样品模板DNA的量，并通过坐标曲线表示出来，结果直观准确。

沙门氏菌（Salmonella）引起的中毒病例在各地的食物中毒病例中所占数量比例非常高。在我国，70-80%细菌性食物中毒事件是由沙门氏菌引起的，沙门氏菌的检测已成为食品质量安全监控的必检卫生指标。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
2. 荧光定量PCR检测，反应特异性强。
3. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
2×qPCR Mix	BTN90408	1mL
stn专一性引物对	yw13891390	200 μL
stn阳性对照， XXX 10E9拷贝/μL	yw13911392	100 μL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

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名称：沙门氏菌单重荧光PCR检测试剂盒
货号：SYA002
规格：48次/盒
一、简介
沙门氏菌(Salmonella)可引发人类、家畜以及野生禽兽不同形式的疾病。感染沙门氏菌的人或带菌者的粪便污染食品，可使人发生食物中毒。据统计在各国的种类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常列榜。本方法为荧光PCR检测方法，反应在同一管内连续进行，操作简单，并有效防止了污染，能对样品中或预培养液中的沙门氏菌进行快速检测，具有特异性高、敏感性强和操作简便的特点。沙门氏菌的探针报告基团为FAM，淬灭基团为None。

二、用途
该试剂盒适合于增菌培养物、疑似病料及食品中沙门氏菌的检测。

三、试剂盒组成(50T/Kit)
组份 数量 规格
沙门氏菌荧光qPCR反应液(Sal-qPCR MIX) 1管 750μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(Sal-PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列，Bio-Rad系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-18℃以下保存，有效期为6个月。

六、样品采集与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》(GB 4789.4-2010)要求进行。
6.1.2 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.3 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取(用户可根据需要选择商业化DNA提取试剂盒)
6.2.1 培养物：取培养物50μL(培养至一定浊度)或者挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.2 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(Sal-qPCR MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(Sal-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(Sal-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明Sal核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明Sal核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行Sal qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明Sal核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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