BTN11-1490 鸡毒支原体PCR检测试剂盒

鸡毒支原体PCR检测试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于生化实验研究等领域，鸡毒支原体PCR检测试剂盒是我司众多优质动物疫病PCR检测试剂盒之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括鸡毒支原体PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：鸡毒支原体PCR检测试剂盒
英文名称：MycopvpAma gallisepticum PCR Kit
产品货号：BTN11-1490
产品规格：50次

本产品根据MG特异性黏附蛋白编码基因pvpA序列，设计了一对特异性检测引物，基于PCR方法对鸡毒支原体进行快速检测。鸡毒支原体（MycopvpAma gallisepticum，MG）是引起鸡慢性呼吸道病的主要病原，引起鸡呼吸道黏膜卡他性炎症及其他鸡传染性支气管炎病毒感染等并发症，导致肉鸡胴体品质下降，鸡群死亡率增高，给养鸡业造成严重的经济损失。

产品特点：
1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板，操作简单。
2. 本产品只适用于科研，不能用于临床诊断。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
即用型PCR Mix 3.0	BTN90805	1.5mL
pvpA专一性引物对	yw13931394	100uL
pvpA阳性对照	yw13951396	50uL
超纯水	BTN00935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

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名称：禽流感病毒(AIV-M)通用型单重荧光PCR检测试剂盒（定性/定量）
货号：SYA320
规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
禽流感病毒实时荧光qRT-PCR检测试剂是按照美国农业部(USDA)的检测标准和我国《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 19438.1-2004)而制备的商业化检测试剂盒。本试剂盒为中的探针报告基团为6-FAM，淬灭基团为MGB。本方法可定性检测所有亚型禽流感病毒。

二、用途：
本试剂盒适用于检测各种禽类喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各种组织样品、尿囊液及细胞培养液等。可用于禽流感病毒感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(AIV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(AIV-PTC) 1 管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-18℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照标准《高致病性禽流感诊断技术》(GB/T 18936-2003 )和《禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法》(GB/T 19438.1-2004 )进行样品的采集。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
（1） 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
（2） 每管加入600 µL裂解液，分别加入被检样本200 µL，再加入200 µL氯fǎng，混匀器上振荡混匀5 s，于4℃ 12000 r 离心15 min。
（3） 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，加入-20℃预冷400µL异丙醇，吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中，避免吸出中间层，颠倒混匀。
（4） 于4℃ 12000 r离心15 min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体；加入600µL 75％预冷乙醇，洗涤。
（5） 于4℃ 12000 r离心10 min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体。
（6） 10000 r离心10 s，用微量加样器将其吸干，室温干燥5 min～10 min。
（7） 加入10µL 无核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r离心5 s，冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃ 冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(AIV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000r离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(AIV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR扩增(PCR amplification ) 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃延伸时收集荧光信号 。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(AIV -PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明AIV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明AIV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行AIV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明AIV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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