RFT117 pUC18载体
产品简介
pUC18载体是高品质的克隆与表达产品,由北京百奥莱博供应,本产品仅用于生物化学研究方面,本产品质量好,且具价格,深为用户称道,了解更多pUC18载体等克隆与表达产品请联系我司咨询订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括pUC18载体在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:pUC18载体
英文名称:pUC18 vector
产品货号:RFT117
产品规格:2μg
pUC18载体适用于双脱氧法对DNA 片段进行测序,它克隆的DNA 片段比使用 M13 phage作载体时克隆的片段长。 由于在 lacZ 领域中含有多克隆位点, 因此可以在含有 IPTG、 X-Gal的平板培养基上通过蓝白筛选判断载体中有无 DNA 片段的插入。同时还可以通过载体上的lac promoter表达外源基因, 使用M13系列的通用引物对插入载体中的DNA片段进行测序。
贮存液:10 mM Tris-HCl(pH8.0) ,1 mM EDTA。
链长:2686 bp。
制备:使用 CsCl-EtBr 密度梯度超离心法纯化。
纯度:
1、含 70%以上的双链 Covalently closed circular DNA(RFI) 。
2、用双脱氧测序法确认多克隆位点。
3、确认 EcoR I,Sac I,Kpn I,Sma I,BamH I,Xba I,Sal I,Pst I,Sph I 和 Hind III只有一个酶切位点。
用途:
1、外源基因的克隆以及使用 lac 启动子进行表达。
2、使用 M13 系列引物进行 DNA测序。
储存条件:-20℃。
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货号 | 名称 | 规格 |
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名称:cl857 Sam7 λDNA(非甲基化)
货号:BTN90407C
规格:5μg
本产品Lambda DNA(λDNA)为λ噬菌体中的DNA,是一种常见的DNA底物,分子量为31.5×106Da/48502bp,浓度为200~500μg/ml。A型为普通Lambda DNA。B型为不含N6-甲基腺嘌呤Lambda DNA。C型为非甲基化的cl857 Sam7 λDNA,是从感染的大肠杆菌GM119菌株中分离得到的。该菌株缺乏dam及dcm甲基化酶活性。非甲基化的λDNA以作为对DNA甲基化敏感的限制性酶的底物。
储存溶液:Tris-HCl(pH8.0)10mM;EDTA 1mM
储存条件:低温运输、-20℃保存、有效期一年。
纯度:
1. OD260nm/280nm>1.8。
2. 琼脂糖凝胶电泳出现清晰单一条带。
3. 1μg的λDNA在Hind III酶切Buffer中37℃保温16小时后,琼脂糖凝胶电泳时出现清晰单一条带。
4. 1g的λDNA 用Hind III酶切(37℃,2小时)后,在琼脂糖凝胶电泳时出现8条清晰的DNA电泳带。
名称:大肠杆菌Rosetta-gami (DE3)pLys化学感受态细胞
货号:BTN130560
规格:0.1mL*10
Rosetta-gami(DE3)pLysS是Rosetta-gami(DE3)的的衍生菌株,用于具有毒性的含二硫键真核蛋白的表达。它是高度严紧表达宿主菌,包括Tunerlac 透性酶突变以及gor B/gor突变帮助细胞质内二硫键形成。
基因型:Δ(ara–leu)7697 Δ lac X74 Δ phoA PvuII phoR araD139 ahpC galE galK rpsL F"[lac+lacIq pro](DE3)gor522::Tn10(TcR)gorB::kan plysS pRARE(CmR)
储存条件:干冰运输、-80℃保存,有效期半年。
自备试剂:目的DNA、SOC或LB培养基等。
使用方法:
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μL,可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。
注意事项:
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多,可取少量转化产物涂布平板;若转化的DNA 总量较少,可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少,可通过离心(4,000rpm,2分钟)后吸除部分培养液,悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干,可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的转化菌落数过少,可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。
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