WH0052 多酚多糖植物总RNA提取试剂盒

多酚多糖植物总RNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要多酚多糖植物总RNA提取试剂盒等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括多酚多糖植物总RNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：多酚多糖植物总RNA提取试剂盒
英文名称：Total RNA Extraction kit from the plant in which polyphenols and polysaccharides are rich
产品货号：WH0052
产品规格：50次

本试剂盒可从植物组织，特别是富含多糖多酚或淀粉的植物组织（如棉花叶片，成熟水稻叶片，拟南芥种子，白松松针，香蕉，枇杷叶片，马铃薯块茎，苹果，梨，西瓜果肉，猕猴桃，月季，烟草，沙棘，百合等）中快速提取总RNA，可同时处理大量不同样品。提取的总RNA纯度高，没有基因组、蛋白和其它杂质的污染，可用于RT-PCR、Real Time RT-PCR、芯片分析、Northern Blot、Dot Blot、PolyA筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆等多种下游实验。

产品特点：
·针对性强：专门针对多糖多酚等难提植物样本独特配置，流程更优化，结果有保障。
·去除基因组：配有DNase I，可在柱上快速去除gDNA。
·简便快捷：仅需1小时即可完成RNA提取实验。
·安全低毒：无需酚和氯fǎng等毒性有机试剂。

不同植物组织RNA提取预期得率：（以100mg样本为例)

样本	RNA得率
香蕉果肉	3～5μg
西瓜果肉	1.5～2.4μg
梨果肉	1.2～2μg
红薯块茎	1.2～2μg
马铃薯块茎	5.5～9μg
白松松针	6～10μg
棉花叶片	15～20μg
月季叶片	20～25μg
枇杷叶片	8～10μg
水稻叶片	20～25μg

分别取100mg香蕉、西瓜、苹果、梨等果肉，红薯、马铃薯等块茎，棉花、月季、枇杷、水稻等的叶片及白松松针等植物样本，采用本试剂盒提取总RNA。洗脱体积30μl，RNA上样量4～6μl，1%琼脂糖凝胶电泳，6V/cm电泳30min.
实验结果证明本试剂盒对广泛的难提取植物样本有优异的总RNA提取效果。

试剂盒组成：

组分	50T
裂解液SL	30ml
去蛋白液RW1	40ml
漂洗液RW	12ml
RNase-Free ddH2O（瓶装)	15ml
RNase-Free吸附柱CR3（含2ml收集管)	50套
RNase-Free过滤柱CS（含2ml收集管)	50套
DNase I（1500U)	1支
缓冲液RDD	4ml
RNase-Free ddH2O（管装)	1ml
Nase-Free离心管（1.5ml)	50个

保存条件：室温（15-25℃)保存。RNase-Free DNase I,缓冲液RDD和RNase-Free ddH2O（管装)置于2-8℃保存；加入β-巯基乙醇的裂解液SL 4℃可放置一个月。

预防RNase污染，应注意以下几方面：
1．经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase污染。
2．使用RNase-Free的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3．RNA在本制品中时不会被RNase降解。但提取后继续处理过程中应使用RNase-Free的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4h，塑料器皿可在0.5M NaOH中浸泡10min，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4．配制溶液应使用RNase-Free ddH2O。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至终浓度0.1%（V/V，放置过夜，高压灭菌）。

注意事项：
1．操作前在SL中加入β-巯基乙醇至终浓度5%，如475μl SL中加入25 μl β-巯基乙醇。此裂解液zuì好现用现配。配好的SL 4℃可放置一个月，裂解液SL在储存时可能会形成沉淀，如果有沉淀出现，请加热溶解后使用。
2．植物组织裂解是否充分直接影响到RNA提取的质量和产量，本试剂盒中提供的裂解液SL，适用于大多数植物组织的裂解，但有些植物组织（例如玉米的乳白色胚乳，红豆种子或小麦种子）或丝状真菌，由于次级代谢产物较特殊，异硫氰酸胍使样品产生沉淀，导致RNA提取效果不佳的现象，购买试剂盒时请提醒我司业务人员更换另一种裂解液HL，将解决该问题。
3．次使用前应在漂洗液RW中加入无水乙醇，加入量请参见瓶上标签。

DNase I储存液的配制：
将DNase I干粉（1500U）溶解在550 μl RNase-Free ddH2O中，轻柔混匀，分装后-20℃贮存（可保存9个月）。
注意：从-20℃融化后的DNase I储存液保存于4℃（可保存6周），不要再次冻存。

RNA提取操作步骤：
以下所有离心步骤均在室温下进行。

1．匀浆处理：
  50-100mg植物叶片或果实果肉在液氮中迅速研磨成粉末，加入500 μl SL（使用前请先检查是否已加入β-巯基乙醇），立即涡旋剧烈震荡混匀。
  注意1：对于预期RNA得率小于10μg的植物样本，请使用100mg的起始样本量；对于富含淀粉的样本或成熟叶片，请将裂解液SL用量增加至700 μl。
  注意2：由于植物多样性非常丰富，而且同种植物的不同生长发育阶段和不同组织的RNA含量都不相同，请根据具体实验情况选择合适的植物材料的用量。
2．12000rpm（~13400×g)离心2 min。
3．将上清液转移至过滤柱CS上（过滤柱CS放在收集管中)，12000rpm（~13400×g)离心2 min，小心吸取收集管中的上清至新的RNase-Free的离心管中，吸头尽量避免接触收集管中的细胞碎片沉淀。
4．缓慢加入0.4倍上清体积的无水乙醇，混匀（此时可能会出现沉淀），将得到的溶液和沉淀一起转入吸附柱CR3中，12000rpm（~13400×g)离心15 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
  注意：如果上清液体积有损失，请相应调整乙醇的加量。
5．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心15 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
6．DNase I工作液的配制：取10 μl DNase I储存液放入新的RNase-Free离心管中，加入70 μl RDD溶液，轻柔混匀。
7．向吸附柱CR3中央加入80 μl的DNase I工作液，室温放置15 min。
8．向吸附柱CR3中加入350 μl去蛋白液RW1，12000rpm（~13400×g)离心15 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
9．向吸附柱CR3中加入500 μl漂洗液RW （使用前请先检查是否已加入乙醇），12000rpm（~13400×g)离心15 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CR3放回收集管中。
10．重复步骤9。
11．12000rpm（~13400×g)离心2 min，将吸附柱CR3放入一个新的RNase-Free离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30-50 μl RNase-Free ddH2O，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心1 min，得到RNA溶液。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于30 μl，体积过小影响回收效率。RNA样品请在-70℃中保存。如果预期RNA得率大于30 μg，可将步骤11中离心得到的RNA溶液再加入吸附柱CR3中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g)离心1 min，得到RNA溶液。

RNA纯度及浓度检测：
完整性：RNA可用普通琼脂糖凝胶电泳（电泳条件：胶浓度1.2%；0.5×TBE电泳缓冲液；150V，15 min)检测完整性。由于细胞中70-80%的RNA为rRNA，电泳后UV下应能看到非常明显的rRNA条带。rRNA大小分别约为5 kb和2 kb，分别相当于28S和18S rRNA；植物叶片中由于含有大量的叶绿体RNA，可见4条或更多rRNA。植物RNA样品中zuì大rRNA亮度应为次大rRNA亮度的1.5-2.0倍，否则表示RNA样品的降解。出现弥散片状或条带消失表明样品严重降解。
纯度：OD₂₆₀/OD₂₈₀比值是衡量蛋白质污染程度的指标。高质量的RNA，OD₂₆₀/OD₂₈₀读数在1.8-2.1之间，比值为2.0是高质量RNA的标志。OD₂₆₀/OD₂₈₀读数受测定所用溶液的pH值影响。同一个RNA样品，假定在10mM Tris，pH7.5溶液中测出的OD₂₆₀/OD₂₈₀读数1.8-2.1之间，在水溶液中所测读数则可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯。
浓度：取一定量的RNA提取物，用RNase-Free ddH2O稀释n倍，用RNase-Free ddH2O将分光光度计调零，取稀释液进行OD₂₆₀,OD₂₈₀测定，按照以下公式进行RNA浓度的计算：
   终浓度（ng/μl）= （OD₂₆₀)×（稀释倍数n)×40

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名称：液体样品RNA和DNA提取试剂盒
货号：BTN80929
规格：50次
本试剂盒是专门用于从各种微量和痕量样品中提取DNA和RNA的试剂盒。

试剂盒特点：
1. 核酸的回收率高，可以达到90%以上，可以跟QIAGEN的同类产品媲美。
2.一管式操作，减少了样品污染的可能。
3.一站式套装，除样品外客户不需要准备任何试剂，降低了实验误差。
4. 安全，不需要使用苯酚和氯fǎng等有机溶液。
5.可以处理各种形态的样品，包括液体样品，单个或少量的细胞，微小胚胎等等。
6.与PCR、荧光PCR、RT-PCR、荧光RT-PCR等后续反应兼容。
7. 试剂稳定，可以长期放置。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	15ml
溶液B	25ml
溶液C	50ml
溶液D	5ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，溶液A和溶液D需要4℃保存，溶液B和溶液C室温保存，有效期一年。溶液B和溶液C具有挥发性，使用后需要将瓶盖拧紧。

使用方法：
1. 将不超过0.1mL的样品转移到自备的1.5mL 旋盖塑料离心管中。
2. 加入0.3mL溶液A，盖上盖子后振荡3-5秒。
注意：溶液A用前需37℃-65℃水浴融化并充分摇匀后方可使用。
3.室温静置10分钟。
4. 加入0.4mL溶液B，盖上盖子后振荡3-5秒。
5. 15000g室温离心15分钟。强烈建议在离心管管壁上用记号笔做简单标记以区别离心面和向心面。
6.小心移弃上清。注意不要触及离心面管底的核酸沉淀。
7. 加入1.0mL溶液C，振荡数秒后15000g室温离心5分钟。
注意：将离心管放入离心机时一定要将离心面向外。
8.小心移弃上清。
注意：不要触及离心面管底的核酸沉淀。
9. 短暂离心数秒。
注意：将离心管放入离心机时一定要离心面向外。
10.小心移弃残留上清(残留的溶液C会影响后续反应)。此时管壁(离心面方向)上将有可见的膜状沉淀。
11. 加入100μl溶液D，用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁的膜状沉淀，使其溶解。溶解液如果混浊或有少量不溶物是正常现象，不溶沉淀物中就裹含有核酸。
12. 直接取适量样品用于PCR或RT-PCR，也可短期保存于-20℃或-80℃。

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