ALH181 鱼类组织DNA提取试剂盒

鱼类组织DNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研目的，我公司的鱼类组织DNA提取试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括鱼类组织DNA提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：鱼类组织DNA提取试剂盒
英文名称：Fish tissue DNA Extraction Kit
产品货号：ALH181
产品规格：50次|100次

本试剂盒采用独特的结合液/蛋白酶K迅速裂解细胞和灭活细胞内核酸酶，然后基因组DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜， 再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤， 抑制物去除液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除， zuì后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。本试剂盒适用于快速提取各种鱼类、虾类、扇贝等组织基因组DNA。

试剂盒组份(100次)：
裂解液SL————————————20ml
结合液CB————————————20ml
抑制物去除液IR—————————50ml
漂洗液WB————————————25ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
蛋白酶K————————————2×20mg
吸附柱AC————————————100个
收集管(2ml)——————————100个

注意事项：
洗脱液EB 不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH 大于7.5， pH 过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA 应该保存在－20℃。DNA 如果需要长期保存，可以用TE 缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl， 1mMEDTA，pH 8.0），但是EDTA 可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）
提示：次使用前请先在漂洗液WB 中加入量无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 切取不多于30mg 的组织材料，放入装有180μl 组织裂解液SL 的1.5ml 离心管中，涡旋振荡15 秒。
根据提取的组织不同，起始量也稍有不同，腮的细胞量较大，一般建议提取量不超过20mg。如果裂解困难，可先用液氮研磨。
2. 加入20μl 的蛋白酶K 溶液(20mg/ml)，立刻涡旋振荡充分混匀。将裂解物放置在55℃水浴1-3 小时或者直到组织消化完全。
不同组织裂解时间不同，通常需0.5–2小时即可完成。扇贝组织0.5小时基本可裂解完全，虾和鱼类组织1小时。每小时振荡混合样品2-3次，每次振荡混匀15秒。
可选做步骤: 如果RNA 残留较多，需要去除RNA，可在完成步骤2 后加20μlRNase A(25mg/ml)溶液，振荡混匀，室温放置5-10 分钟。
3. 加入200μl 结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。
4. 冷却后加100μl 异丙醇，充分颠倒或涡旋振荡充分混匀，此时可能出现絮状沉淀。
5. 将上一步混合物和可能的沉淀都加入一个吸附柱AC 中，（吸附柱放入收集管中）13000rpm 离心60 秒，倒掉收集管中的废液。
如果有不溶组织物可能堵住枪头，可将枪头在吸水纸上轻蹭去除不溶物；如果吸上来的混合物少则可以将枪头和不溶物一起弃去，该做法是为了去除不溶物，以免堵塞离心柱。
上述步骤中立刻涡旋或者吹打充分混匀非常重要，混匀不充分严重降低产量，必要时如样品粘稠不易混匀时可以涡旋振荡15秒混匀。
6. 加入500μl 抑制物去除液IR，12000rpm 离心30 秒，弃废液。
7. 加入700μl 漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12000rpm 离心30秒，弃掉废液。
8. 加入500μl 漂洗液WB，12000rpm 离心30 秒，弃掉废液。
9. 将吸附柱AC 放回空收集管中，13,000rpm 离心2 分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
10. 取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加100μl 洗脱缓冲液EB（洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好），室温放置3-5 分钟，12000rpm 离心1 分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2 分钟，12000rpm 离心1 分钟。
洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是zuì小体积不应少于50μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。
11. DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

储存条件：室温，有效期12个月。

本制品别名：虾DNA提取试剂盒|扇贝DNA提取试剂盒|鱼DNA提取试剂盒

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名称：非冻型组织DNA保存液
货号：BTN3660
规格：250mL
本品是我公司推出的在室温条件下长期保存DNA样品的保存液。它能迅速渗入细胞内，通过抑制DNase的活性而长期保证DNA的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可室温保存动植物组织长达两年，保护DNA不被降解。
2. 安全可靠，本产品无害，从DNA保存液保存的样品中提得的DNA可用于酶切和PCR等分子生物学实验。
3. 使用简单，直接把新鲜的动植物样品浸在DNA保存液中即可。
4.可广泛用于各种动植物标本的野外采集。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

步：准备工作
1.估计完全浸没样品所需要Tissue DNA保存液的体积。
注：1g 组织约需10mL Tissue DNA保存液。
2.标记收集管并加入估计所需量的Tissue DNA保存液。

第二步：样品的处理
1.以zuì快速度将样品剪切成厚度小于0.5cm的碎块。
注：鼠肝、肾和脾等小器官样品和没有蜡质保护层的植物样品可不需剪切而直接放入本产品中保存，有蜡质保护层的植物样品需要先将蜡表皮破坏。
2.将组织碎块完全浸没于收集管的Tissue DNA保存液中。

第三步：样品的存放
将收集管存放于温度适当的地方，保存温度不要低于4℃。

第四步：样品的使用
1.从存放处取出样品，用消过毒的镊子将组织碎块从保护液中取出。
2.立即开始DNA提取。

名称：柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)
货号：BTN80803
规格：50次
线粒体DNA(mtDNA)是进行分子进化研究和母性遗传研究的重要材料，但传统的两步式mtDNA提取方法是先温和裂解细胞，分离线粒体，然后再从线粒体中提取mtDNA。此方法中的温和裂解细胞的条件十分难以控制，需要针对不同组织材料单独进行优化。本试剂盒克服了上述缺点。

产品特点：
1. 不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。
2. 得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3. 每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。
4. 注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大，非常难提。

产品组成：

成分	规格
溶液A	13ml
溶液B	13ml
溶液C	18ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
DNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，短期可以在室温放置；长期保存zuì好放4℃。

使用方法：

一：培养细胞预处理
1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞，离心收集后弃上清。
2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次，离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二：组织细胞预处理
3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小zuì好)，转移到1.5mL塑料离心管中，用于mtDNA提取。注意：zuì好不要使用冻存的动物组织，因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破，使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解，影响回收率。
三：血液预处理
4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟，取白细胞层。
5. 用自备PBS洗涤白细胞两次，得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。
四：mtDNA提取
5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A，充分吹打分散。如果是剪碎的组织，不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。
6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀，用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用)，温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。
7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。
8. 加入350μL冰浴的溶液C，温和混匀4-6次，可见白色沉淀物产生，然后放冰上放置20-25分钟。
9.室温12000～15000g离心10分钟，小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大，有时候出现沉淀漂浮是正常现象，取上清时避开漂浮的沉淀即可。
10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合，此步十分重要。
11.室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中的废液。
12. 加入500μL的通用洗柱液，室温12000～15000g离心1分钟，弃收集管中废液。
 注意：通用洗柱液中含乙醇，用后需要将盖拧紧存放，否则乙醇会挥发。
13. 重复上步1次。
14.室温12000～15000g离心1分钟，甩干残留液体。此步不能省略，否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。
15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中，加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液，室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱，但产量稍微有所降低。
16.室温12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强，如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中，往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%)，但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。
18. 12000～15000g离心1分钟，离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩，可以使用本公司的核酸浓缩剂。
19. 由于DNA机械断裂，电泳时DNA可能不呈现专一的带，但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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