BTN160692 内毒素清除试剂盒
产品简介
内毒素清除试剂盒由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,仅用于生物化学研究方面,本产品质量好,且具价格,深为用户称道,了解更多内毒素清除试剂盒等DNA提取纯化产品请联系我司咨询订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括内毒素清除试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:内毒素清除试剂盒
英文名称:Endotoxin removing Kit
产品货号:BTN160692
产品规格:1.5mL
本试剂盒使用的是一类内毒素清除树脂,它以修饰过的多粘菌素B(PMB)为配体,进行特异性的内毒素清除。经此专用亲和介质纯化,样品zuì终的内毒素水平可低于0.1 EU/mL。
细菌内毒素(脂多糖,LPS)是革兰氏阴性细菌细胞壁的主要成分。人们在研究革兰氏阴性菌血症和内毒素血症的过程中,发现细菌内毒素在其中起着关键的作用,内毒素使机体免疫功能严重受损,进一步的发展可能引发脓毒性休克,弥散性血管内凝血,急性呼吸窘迫综合症,全身炎症反应综合症或致命性多器官功能衰竭。因此,内毒素的清除对于人类疾病治疗的注射型药品、生物制品等都是必须的,尤其对于基因药物、蛋白药物、单抗克隆药物、治疗性疫苗、小分子化学药物等生物制品的下游纯化处理来说就显得非常重要。
试剂盒特点:
1.高稳定性,高去除效率。
2.高结合力:> 2000,000 EU/mL。
3. pH范围为5-10时,亲和介质对内毒素的清除率在92%以上;pH值在7-8时,清除效率zuì高。
4. 无需恒流泵即可调节流速。
5. 重复使用 5次不会改变柱子效果。
6. 使用方便,试剂盒中提供无热原缓冲液,无热原收集管及无热原枪头等。
7.适合纯化对象为蛋白,多肽,抗体,多糖等。
8.可耐受试剂:20% DMSO,20% 乙醇,20% 甘油;1 M 尿素,300mM咪唑; 0.05% 吐温-20,10mM DTT等。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
专用亲和介质 | 1.5mL预装柱 |
再生缓冲液 | 125ml |
平衡缓冲液 | 125ml |
流速控制器 | 1个 |
无热原接收管 | 1 包(3 支/包) |
无热原枪头(1mL) | 2 包(6 支/包) |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
使用方法:
1.样品处理:样品的pH值和离子强度在内毒素去除的过程中起着重要作用。虽然结合内毒素的pH范围在6-9,但是7-8的pH范围是纯化的zuì佳范围。合适的离子浓度可以降低非特异性吸附,0.15-0.5 M NaCl的条件可以得到一个很好的去除效率和低的样品损失。所以,纯化之前可以使用处理过的氯化钠,0.1 M的氢氧化钠或0.1 M盐酸来调节离子强度或pH值。
2.活化亲和介质:将预装柱置于铁架台,垂直固定,去除预装柱顶部的盖子,打开流速控制器,使保护液在重力作用下流干,加入5mL的(预冷)再生缓冲液,调节流速控制器,保持流速在0.25mL/min(或者10滴/min),待再生缓冲液流干,再加入5mL 再生缓冲液,再重复操作两次,确保体系保持无热原(即内毒素)存在。即使是次使用也必须进行这一步操作。这步操作大约需要60分钟完成。
3. 平衡亲和介质:活化完毕后,加入6mL的(预冷)平衡缓冲液,调节流速控制器,保持流速在0.5mL/min,流干平衡缓冲液,再按此操作重复两次。这步操作大约需要40分钟完成。
4.内毒素清除:将流速控制器关闭,使用无热原枪头将样品加入,打开控制器,控制流速不高于0.25mL/min,流出液体积达到1.5mL后,使用无热原接收管接受样品,样品流干后,再加入1.5mL-3.0mL的(预冷)平衡缓冲液淋洗,收集淋洗液。检测样品浓度及内毒素水平。
5. 再次使用:如果流出样品内毒素水平未能达到预期值,需要将预装柱重新再生,按照步骤1 重新再生,然后上样纯化。
6. 储存条件:如果预装柱用完后需要保存,先用10mL 平衡缓冲液平衡柱子,待平衡液流干,加入1.5mL的再生缓冲液(含0.02%的叠氮化钠)。
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痰液是重要的检测样品,可以用于诊断肺癌,肺结核等各种疾病。但是从痰液中纯化DNA十分棘手,为此本公司开发了本产品,专用于从痰液或其他上呼吸道分泌样品中纯化DNA,用于后续的分子生物学分析。
产品特点:
1. 每次可以处理10-20mL痰液,得到2-5μg DNA。
2. 纯度高,可直接用于后续得PCR检测。
3.一管式操作,减少污染,节约成本。
4.含痰液保存液(溶液A),便于取样和运输。
5. 环保,不需要使用苯酚和氯fǎng等有毒的有机溶液。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
溶液A(痰液细胞固定液) | 500ml |
溶液B(痰液解稠剂) | 500ml |
溶液C | 30ml |
说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存,有效期一年。
使用方法:
一:痰标本的获取与保存(注意:痰液以及下列操作的废弃液都可能含有致病性的结核杆菌等致病菌,需按传染源相关规定流程进行操作)
1. 每例患者在常规痰标本采样时,zuì好连续三天采集三次样品以防误差。具体做法是先在每个50mL的痰液收集管内新鲜加入10mL溶液A和10mL溶液B,待患者晨起漱口后,咳深部痰7~8口(约10-20mL),收集到装有溶液A和溶液B混合液的痰液管收集内,混匀后储于4℃冰箱或阴凉处。第二、三天重复此操作。取足三管后一起送实验室,4℃冰箱保存直到使用。
2. 使用时,在室温反复振摇装有样品(总体积约30-40mL)的痰液收集管5~10分钟,充分混匀直到痰液中无粘稠痰块而呈均匀的液相。
3. 4℃2500g离心5分钟,弃上清。
4.沉淀再用自备的PBS液洗两遍。
5. 所得沉淀可以直接用于涂片,用于比较细胞形态学分析。也可以将细胞沉淀在0.2mL PBS缓冲液中重悬后转入1.5mL螺旋盖塑料离心管,-20℃冰箱长期保存,或立即用于下步的DNA提取。为避免盖子崩开而出现交叉污染或痰液的分枝杆菌污染环境,建议不要使用压盖式塑料离心管。同时zuì好设置一个阳性和一个阴性对照。
二:DNA提取
6.在上步所得的0.2mL样品中加入0.6mL溶液C。溶液C容易形成沉淀,用前需37℃加热融化并摇晃均匀。
7.室温放置10分钟。此间可以在每个管外壁上做个标记,以在下步区别向心面和离心面。
8. 振荡数秒后加入0.7mL自备的异丙醇,旋紧盖后振荡30秒混匀。
9. 把离心管的向心面对向转头,13,000-15000g室温离心至少15分钟。
10.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀(此时可能看不见)。
11. 加入1.0mL 70%乙醇,振荡数秒后 15000g室温离心5分钟。注意:在离心机中放置离心管时将其向心面对向转头的中央。
12.小心移弃上清,注意不要触及管底和管壁离心面的DNA沉淀(此时呈膜状沉淀)。
13. 将离心管放回离心机再短暂离心数秒,然后用移液器移弃约50μL残留液体(70%乙醇),否则它会影响后续反应。
14. 加入200μl RNase-free水,用移液枪仔细吹打离心管管底和管壁离心面的膜状DNA沉淀,溶液将呈混浊状,含少量不溶,短暂离心后存上清(含DNA)。
15. 直接取适量用于PCR,样品使用量不超过PCR体系的1/2。剩余DNA样品可以室温放置2小时,也可保存于-80℃保存一个月。
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