BTN11-2325 牛病毒性腹泻病毒RT-PCR试剂

牛病毒性腹泻病毒RT-PCR试剂由专业试剂供应商北京百奥莱博提供，仅用于生物化学研究方面，我公司专注于病毒PCR检测试剂盒产品的研发、生产和供应，为您提供的牛病毒性腹泻病毒RT-PCR试剂质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括牛病毒性腹泻病毒RT-PCR试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：牛病毒性腹泻病毒RT-PCR试剂盒
英文名称：Bovine viml diarrheamucosal disease virus RT-PCR Kit
产品货号：BTN11-2325
产品规格：50T

本产品采用RT-PCR技术检测疑似感染动物血清或组织中的BVDV。牛病毒性腹泻--粘膜病（Bovine viral diarrheamucosal disease，BVD-MD）是由牛病毒性腹泻病毒（Bovine viml diarrheamucosal disease virus，BVDV）引起的以粘膜发炎、糜烂、坏死和腹泻等特征为主的疾病。该病在各地广泛流行和传播，一些畜牧业发达的尤其严重。因此，BVDV的快速准确鉴定，对该病的预防和检疫有着重要作用。

产品特点：
1. 用于BVDV的定性鉴定检测和分子流行病学调查。
2. 能对样品中BVDV进行快速检测，具有良好的特异性和敏感性。
3. 使用一管式RT-PCR试剂盒，减少了操作步骤，降低了操作误差。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
双酶一管式RT-PCR Buffer，2×	BTN91202A	750μL
MMLV-Taq Mix	BTN91202B	100μL
BVDV专一性引物对	yw12811282	200μL
BVDV阳性对照	yw12831284	50μL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

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规格：48次/盒
一、简介：
本试剂盒用一对猪流行性腹泻病毒特异性引物，结合一条特异性荧光探针，用一步法荧光RT-PCR技术对猪流行性腹泻病毒RNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。本试剂盒中猪流行性腹泻病毒的探针报告基团为FAM。

二、用途：
本试剂盒适用于病猪血液、肠系膜淋巴结、扁桃体、肠组织(空肠中段)、肠内容物以及粪便等标本中的猪流行性腹泻病毒(PEDV)特异性检测。适用于猪流行性腹泻病毒(PEDV)感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
猪流行性腹泻病毒反应液(PEDV-qRT-PCR MIX) 1管 672μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
阳性对照(PEDV-PTC) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照相关标准采集。标本短期内可保存于-20℃，长期保存可置-80℃，但不能超过6个月，标本运送应采用0℃冰壶。
6.1.1 血清：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入无菌的干燥玻璃管，室温(22-25℃)放置30-60min，血标本可自发完成凝集析出血清，或直接使用水平离心机，3000rpm离心5min，吸取上层血清，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.2 血浆：用一次性无菌注射器抽取静脉血2mL，注入含EDTA2Na(乙二胺四乙酸二钠)或柠檬酸钠抗凝剂的玻璃管，立即轻轻颠倒玻璃管混合5-10次，使抗凝剂与静脉血充分混匀，5-10min后即可分离出血浆，转移至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.1.3 拭子、分泌物等样品：在装有拭子或分泌物的离心管中加入500µL PBS或生理盐水，剧烈振荡30s。棉拭子尽量挤出液体转移到无DNA酶污染的离心管中备用。
6.1.4 病灶组织样品：称取组织约0.1g于研磨器或组织匀浆器中研磨(zuì好置于冰上或加入液氮)，再加1mL生理盐水研磨至无块状物，然后将样品转至1.5mL灭菌离心管中备用。
6.2 RNA提取
可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的RNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(PEDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加15μL，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(PEDV-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qRT-PCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 10 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 45 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX 参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(PEDV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明PEDV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明PEDV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行PEDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明PEDV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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