SY0017 JM109化学感受态细胞

JM109化学感受态细胞由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，我公司专注于克隆与表达产品的研发、生产和供应，为您提供的JM109化学感受态细胞质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括JM109化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：JM109化学感受态细胞
英文名称：JM109 Chemically Competent Cell
产品货号：SY0017
产品规格：100μl×10管

本品是经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。经使用pUC19质粒检测，本品转化效率可达108 cfu/μg，广泛适用于的DNA克隆和质粒扩增，能保证高拷贝质粒的稳定遗传。本品适用于蓝白斑筛选，另对recA1和endA1进行特定的改造使其更能保证克隆DNA的稳定性以及更有利于高纯度质粒DNA的提取。在基因重组实验中，常使用感受态细胞摄取外源DNA以制备基因文库、重组质粒以及进行亚克隆等。

JM109感受态细胞基因型：recA1 endA1 gyrA96 thi-1 hsdR17 e14-(mcrA-) supE44 relA1 △(lac-proAB)/F’ [traD36 proAB+ lac Iq lacZ △M15]。

组份：JM109感受态细胞 100μl×10，pUC19(0.1 ng/μl) 5μl

注意事项

1）感受态细胞应保存在-80℃，不可反复冻融和放置时间过长，以免降低感受态细胞的转化效率。
2）整个转化操作，严格根据相应温度及无菌条件要求进行。
3）为确保zuì高转化效率，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温，避免移液枪吹吸。
4）为防止转化不成功，可以保留部分连接反应液，以重新转化，zuì低化实验可能遇到的风险。

使用方法
1）取100 μl感受态细胞置于冰浴中融化。
2）向100 μl感受态细胞悬液中加入2-10μl目的DNA或连接产物，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置20min。
3）将离心管置于42℃水浴中放置90s，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2min，该过程不要摇动离心管。
4）向离心管中加入500μl无菌的SOC或LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养60min（200 rpm），目的是促使菌体复苏，抗性基因表达。
5）将离心管内容物混匀，根据实验要求（质粒，重组连接产物转化），吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的SOB或LB固体琼脂培养基上，用无菌玻棒轻轻的将细胞均匀涂开。室温正置10 min，待液体被吸收后，倒置平板，37℃培养12-16 h。

储存条件：-80℃

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名称：单细胞裂解液(DNA提取)
货号：BTN130803
规格：1mL
本产品为单细胞DNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定。纯化所得DNA可用于全基因组扩增(WGA)等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

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规格：1mL
本产品为单细胞RNA提取专用裂解液，本裂解液经多次优化，含有多种去污剂、变性剂和盐，可有效抑制核酸酶在裂解过程中对核酸的破坏，维持核酸结构的稳定含有常用。纯化所得RNA可用于测序、单细胞PCR等实验。本产品足够使用200次以上。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：胚胎裂解液
货号：BTN130806
规格：1mL
本产品是胚胎培养过程中分离单个胚胎细胞的裂解液。可用于分离得到不同时期的胚胎的单细胞，得到的单细胞可用于各种单细胞分析，核酸提取等实验。

储存条件：低温运输，4℃保存，有效期两年。

名称：酵母电转感受态细胞制备液
货号：BTN81201
规格：20次
本酵母电感受态细胞制备试剂是一种通过化学处理酿酒酵母和裂殖酵母电感受态细胞，使之不但马上能用于电转化，还能长期放置后用于电转化。

产品特点：
1. 操作简单，单溶液制备，除酵母培养的时间外，整个操作只需要10余分钟。
2. 制备得到的感受态细胞可以-80℃保存一年，方便多次使用，免去每次转化都要新鲜制备感受态细胞。
3. 主要用于酿酒酵母S.cerevisia和S.pombe，但能否用于其他酵母(如C.albicans、Pichia pastoris等)不详。
4. zuì高转化效率可达到0.2-1×106个转化子/ug质粒DNA。
5. 得到的感受态细胞可以用各种线性或环状酵母穿梭质粒DNA进行转化，例如YIp，YRp，YCp，YEp和YAC等。
6.可以用于酵母双杂交、定点突变、基因破坏、等位突变基因修复等实验。
7. 本试剂盒足够处理200mL酵母菌液，制备40管酵母感受态细胞。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

自备试剂：
灭菌水，SD液体培养基(不含氨基酸的0.67% Bacto Yeast Nitrogen base，2%葡萄糖)，SD固体培养基(在SD液体培养基中再加2%琼脂)，YPD液体培养基(1% Bacto Yeast Extract，2% Bacto Peptone，2%葡萄糖)，YPD固体培养基(在YPD液体培养基中再加2%琼脂)

使用方法：

一：电感受态细胞的制备
 说明：按本方法制备1 管酵母电感受态细胞就需要OD600达到1.0的新鲜酵母培养液5mL，用户需根据制备的酵母感受态细胞数量决定培养细胞的体积。下面操作只是以10mL酵母为例说明。
1.培养S.pombe细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到10mL SD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
2.培养S.cerevisiae细胞：挑取新鲜单菌落(4℃放置不超过3周的也可以)，接种到装在10mL YPD液体培养基中。30℃摇晃培养，摇床速度250rpm/分钟，直到OD600达到1.0左右(相当于1×107细胞/mL)。
3. 冰上放置15分钟。
4.室温1600rpm离心5 min，弃上清。
5. 用冰浴的灭菌水洗涤3次。
6. 用0.2mL冰浴的本产品重悬细胞。
7. 按每管0.1mL分装到1.5-2mL的冷冻管中，直接放入-80℃冰箱待用。
 注意：不能放在液氮中，否则将丧失电转化能力。

二：电转化酵母感受态细胞
1. 将装有0.1mL感受态细胞的冷冻管从冰箱取出的、放置在30℃水浴中快速化冻(快速化冻的效果好于缓慢化冻)。
2. 用1mL冰浴的本产品洗涤一次。
3. 加入50μL冰浴的本产品重悬细胞。
4. 加入1-30 ng质粒DNA 并轻柔混匀。
5.转移到预冷的、距离为0.2cm的电击杯中。
6. 按电击仪的手册设置电击参数并进行电击处理，参考条件为：10kV/cm(对0.2 cm的电击杯，则为2kV)，5ms(25F，200)(各厂家仪器的使用略有不同，请严格按电击仪厂家提供的手册进行操作)。
7.电击后将细胞转移到1mL预冷的本产品中，轻柔混匀。
8. 取0.2mL转化细胞涂盘(S.pombe细胞需涂盘在SD 固体培养基上，S.cerevisiae细胞需涂盘在YPD固体培养基上)，30℃培养4-6天。

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