BTN100839 PCR级甲酰胺
产品简介
PCR级甲酰胺由专业试剂供应商北京百奥莱博提供,用于科研目的,我公司的PCR级甲酰胺品质上佳,经过多年的开发生产,已然非常成熟,欢迎广大新老客户订购。...
产品详细介绍
特别提示:包括PCR级甲酰胺在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:PCR级甲酰胺
英文名称:Formamide,PCR Grade
产品货号:BTN100839
产品规格:250mg
本产品为PCR级的甲酰胺,其可以促进某些引物、模板退火,降低带有二级结构的DNA的变性温度,是一种常用的PCR增强剂。
储存条件:低温运输、-20℃保存,有效期一年。
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货号 | 名称 | 规格 |
BTN160903 | 可调式易错PCR试剂盒 | 100次 |
BTN131181 | EDTA溶液 | 1mL |
WE0129 | 一步法RT-PCR试剂盒 | 100次 |
WE0158 | miRNA荧光定量检测试剂盒 | 125次 |
ALH209 | KOD DNA聚合酶 | 250U|500U |
SY0042 | 脱氧胞苷三磷酸溶液(100 mM)(dCTP) | 400μL |
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名称:DNA Shuffling试剂盒
货号:BTN131178
规格:10次
DNA Shuffling即DNA分子的体外同源重组,它是一种分子水平上的定向进化(directed evolution)技术,它以一个或多个基因为起始材料,通过先随机断裂成小片段,再进行互为模板和引物的PCR(无外加引物),zuì后再进行常规PCR(外加引物)等处理,zuì后得到含有大量DNA重组突变的PCR产物。其原理示意图如下:
产品特点:
1.即开即用,用户只需要提供样品DNA模板,无需单独准备各成分。
2.操作手册经过优化,1-2天即可完成,节省大量优化时间。
3.本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
试剂盒组成:
成分 | 规格 |
PCR Mix 3.0,2× | 1.5mL |
DNase I溶液(1U/μL) | 10μl |
溶液A,10× | 60μl |
溶液B,10× | 60μl |
超纯水 | 1mL |
说明书 | 1份 |
储存条件:低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
使用方法:
1.待突变基因片段的制备:待突变基因片段可以用含此基因的质粒为模板、用PCR法或酶切法制备。制备时需保证含此基因(或此基因的一部分)的DNA片段总长度不要超过1kb,同时比DNA shuffling终产物(第二轮PCR产物)长200-400bp。每次DNA Shuffling实验至少需要2μg起始DNA片段(如果含几个基因片段,则彼此的比例为1:1),并且必须通过胶回收的方法回收,以便彻底去除残留的质粒模板、引物和非特异扩增产物等。zuì后需用分光光度法准确定量。
2.提前准备37℃和75℃水浴,同时新鲜配制0.1U/μL的DNase工作液放冰上待用(必须在用时才配制,方法是将1μl 本试剂盒提供的1U/μL的DNase I溶液和1μl溶液A和8μl超纯水混合)。此溶液需在24小时内使用。
3.在一个离心管中,按顺序加入下列成分:
成分 | 用量 |
待突变基因片段(第1步制备) | 2μg |
溶液A | 5μl |
溶液B | 5μL |
DNase I工作液(第2步制备) | 2μL |
超纯水 | 36μL |
4.充分轻柔吹打混匀后37℃水浴8分钟,然后立即放75℃水浴处理10分钟以灭活DNase I。
5.在2-3%琼脂糖凝胶上电泳,用常规的胶回收法回收25-150bp范围的所有片段待用。注意:一定要加合适的DNA marker以便确定片段范围,zuì好使用本公司生产的绿如蓝核酸染料(可见光型)作为电泳染料以避免用UV照射DNA,否则UV使DNA发生的交联将大降低后续扩增效果。
6.分光光度法测定回收片段的浓度。
7.在PCR管中按顺序加入0.5μg上步回收得到的回收片段、50μl 2×PCR Mix、加超纯水到100μl。
8.按下面的PCR反应参数进行轮无引物PCR:
过程 | 温度 | 时间 |
PCR前变性 | 94℃ | 150s |
PCR反应(40循环) | 94℃ | 30s |
47.5℃ | 45s | |
72℃ | 10s,每次循环后增加5s | |
PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
9.取5-10μl进行电泳检测,然后进行PCR回收,得到轮PCR产物。
10.将回收的轮PCR产物1μl原液作为模板设置3管第二轮PCR反应。
成分 | 用量 |
回收的轮PCR产物 | 1μL |
PCR Mix 3.0,2× | 50μL |
自备DNA Shuffling引物 | 各1μM |
超纯水 | 加水到100μL |
11.按下列PCR参数进行第二轮PCR。
过程 | 温度 | 时间 |
活化 | 94℃ | 150s |
PCR反应(25次循环) | 94℃ | 30s |
47.5℃ | 45s | |
72℃ | 60s,每次循环后增加5s | |
PCR后延伸 | 72℃ | 10min |
12.电泳检测,回收预期大小的PCR产物,用于后续的构建克隆文库实验(略)。
疑难解答:
Q:易错PCR和DNA Shuffling有何区别?
A:前者引入的是点突变,后者引入的是重组突变。示意图如下:
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