BTN11-180404 溶血性链球菌荧光Lamp检测试剂

北京百奥莱博供应的溶血性链球菌荧光Lamp检测试剂用于生化实验研究等领域，溶血性链球菌荧光Lamp检测试剂是我司众多优质细菌PCR检测试剂盒之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括溶血性链球菌荧光Lamp检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：溶血性链球菌荧光Lamp检测试剂盒
英文名称：Streptococcus hemolyticus LAMP Amplification Kit
产品货号：BTN11-180404
产品规格：50次

本产品是针对溶血性链球菌scp 基因设计的LAMP 特异引物组，采用环介导等温扩增法结合荧光染料显色的体外扩增检测技术，适用于溶血性链球菌核酸的快速检测。

溶血性链球菌可引起食物中毒与临床感染，感染人体可导致新生儿败血症、脑膜炎、肺炎等多种严重感染性疾病，甚至死亡。根据溶血性链球菌族特异性抗原的不同，分为18 个族，其中A、B、C、D 、F 、G 族对人类有致病能力。溶血性链球菌感染人类宿主与scp 基因编码的C5a-肽酶有关，这一基因在不同的致病性溶血性链球菌中有很高的一致性，但不存在于其他菌株中。LAMP 等温扩增（环介导等温扩增）利用4 条模板专一的特异引物和具有链置换能力的DNA 聚合酶，在等温条件下(63℃左右) 30-60分钟完成扩增。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR 技术，同时还不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程，不依赖任何专门的仪器设备。

产品特点：
1. 对溶血性链球菌的scpA 基因具有高的特异性，由于同时使用4-6条特异引物，所以特异性比PCR更高。
2. 高扩增效率，扩增效率可达到10E9-10E10，比PCR 灵敏一个数量级，可检测到单拷贝的DNA 分子。
3. 65℃左右等温扩增，不需要贵重的热循环仪。
4. 即开即用，包含了除引物和模板DNA 外的所有成份，十分方便。
5. 肉眼检测扩增结果，不需要昂贵的电泳、荧光PCR 等仪器。
6. 提供扩增对照，便于在遇到困难时分析原因。

产品组成：

组分	编号	规格(50T)
LAMP Mix（2×）	BTN11-180405a	0.5mL
Bst DNA 聚合酶(8U/uL)	BTN100209	75uL
对照引物	BTN11-180405b	40uL
对照模板DNA	BTN11-180405c	5uL
25mM MgCl2	BTN90302	0.2mL
超纯水	BTN100935	1mL

保存条件：-20℃保存，有效期一年。

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一、简介：
本试剂盒用一对金黄色葡萄球菌肠毒素B特异性引物，对金黄色葡萄球菌肠毒素B DNA进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途：
该试剂盒适合于检测水样粪便、疑似污染物的水、食物等样本中的金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)，用于金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成：(48T)
组份 数量 规格
金黄色葡萄球菌PCR反应液(SEB-PCR MIX) 1管 672μL/管
DNA抽提液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 48μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 107copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 106copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 105copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 104copies/μL) 1管 50μL/管
肠毒素B阳性对照(SEB-PTC 103copies/μL) 1管 50μL/管

四、储存条件及有效期：
本试剂盒于-20℃以下保存，有效期为6个月。

五、PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等PCR检测仪等。

六、样品的采集与DNA提取
6.1 样品的采集
6.1.1 食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品安家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验》(GB 4789.10-2010)要求进行。
6.1.2 粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
6.1.3 病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
 注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
6.2 DNA提取
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购北京百奥莱博科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
6.2.1液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.2固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
6.2.3 粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
6.2.4 其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
 注：建议采用相关标准方法进行前增菌，并按照6.2.1方法进行提取。阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qPCR反应液(SEB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(SEB-PTC103、104、105、106、107copies/μL)5μL(建议由低浓度向高浓度顺序加入反应液，避免高浓度阳性对照品污染反应液)，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM，淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(SEB-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明SEB核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明SEB核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行SEB qPCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明SEB核酸阳性；否则判为样本阴性。
（5） 标准曲线相关系数数值介于0.97~1之间。(相关系数数值等同于r2值)，根据斜率及Y轴截距列出计算公式，并通过标准曲线计算样品RNA含量拷贝数。
例如：Y轴截距=41.5 斜率=-3.83
公式为：Y=-3.83(logX)+41.5

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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