RFT037 细菌基因组DNA提取试剂盒
产品简介
细菌基因组DNA提取试剂盒是高品质的DNA提取纯化产品,由北京百奥莱博供应,本产品用于科研试验,我公司专注于DNA提取纯化产品的研发、生产和供应,为您提供的细菌基因组DNA提取试剂盒质量可靠,批间差小,且价格公道,热切盼望您选购我们的产品。...
产品详细介绍
特别提示:包括细菌基因组DNA提取试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:细菌基因组DNA提取试剂盒
英文名称:Bacterial genomic DNA Extraction Kit
产品货号:RFT037
产品规格:50次|100次
本试剂盒采用可以特异性结合DNA的离心吸附柱和独特的缓冲液系统提取细菌(革兰氏阳性菌和阴性菌)的基因组DNA。溶菌酶能有效去除细菌细胞壁;蛋白酶K能把核酸解离出来; RNaseA能去除痕量的RNA污染;离心吸附柱能够、专一吸附DNA,zuì大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物,提取的基因组DNA片段大,纯度高,质量稳定可靠。使用本试剂盒回收的DNA可适用于各种常规操作,包括酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒组成:
组份 | 50次 | 100次 | 贮存方式 |
缓冲液GA | 15 ml | 30 ml | 室温 |
缓冲液GB | 15 ml | 30 ml | 室温 |
去蛋白液GD(浓缩液) | 18 ml | 36ml | 室温 |
漂洗液GW(浓缩液) | 25 ml | 25 ml | 室温 |
洗脱缓冲液EB | 15 ml | 15ml | 室温 |
蛋白酶K(20mg/ml) | 1 ml | 2×1 ml | -20℃ |
溶菌酶(5mg/ml) | 1ml | 2×1 ml | -20℃ |
RNase A(10mg/ml) | 1ml | 1 ml | -20℃ |
吸附柱CG | 50个 | 100个 | 室温 |
收集管(2 ml) | 50个 | 100个 | 室温 |
说明书 | 1份 | 1份 |
准备工作:
1、准备55℃和70℃水浴;无水乙醇;1.5ml灭菌离心管。
2、按照标签所示在去蛋白液GD和漂洗液GW中加入无水乙醇,混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3、每次使用前请检查缓冲液GA,缓冲液GB和去蛋白液GD是否有沉淀生成,如果出现沉淀,37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
操作步骤:
如非指出,所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、取细菌培养液1–2 ml,10,000 g离心1分钟,尽量吸净上清;向细菌沉淀中加入180μl EB,旋涡混匀后加入18μl 溶菌酶,室温放置10-15分钟,期间间歇混匀几次。
注:溶菌酶的用量和处理时间与处理的细菌种类密切相关,用户可以根据细菌种类进行调节。如革兰氏阳性菌应将处理时间延长到30-60分钟。
2、10000g离心1分钟,吸弃大部分上清,留下约10μl液体,彻底混匀。
注:由于余留的液体较少,彻底混匀菌体不太容易,用手指弹动管壁附加枪头反复吹打既能完全混匀菌体。混匀一定要彻底,否则容易导致步骤8中离心柱堵塞。
3、向菌体沉淀中加入200μl缓冲液GA,混匀。
4、向管中加入20μl 蛋白酶K,混匀,55℃处理15-30分钟,期间间歇混匀2-3次至溶液清亮。
注:加入蛋白酶K后会产生絮状物,消化彻底的标志是絮状物完全消失,溶液变清亮。如消化不彻底,会导致步骤8中离心柱堵塞。
5、加入10μl RNaseA(10 mg/ml)溶液,混匀后室温放置2分钟。
6、加入220μl缓冲液GB,混匀,70℃放置10-30分钟(对于革兰氏阳性菌,时间应延长到60分钟)。
注:加入缓冲液GB时可能会产生白色沉淀,一般70℃放置相应时间后溶液会变清亮。如溶液未变清亮,应延长70℃处理时间。如果絮状物不能处理干净,容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
7、加入220μl无水乙醇,充分混匀。
注:加入乙醇后会产生絮状沉淀,可用枪头反复抽打1-2次将沉淀弄碎后再上柱。如果絮状物未做处理,容易导致步骤8中离心柱的堵塞。
8、将上一步所得溶液和絮状沉淀加入到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中),11000g离心5分钟,倒掉废液,吸附柱CG放入收集管中。
注:如果出现吸附柱堵塞现象,可将离心时间延长到10分钟。
9、向吸附柱CG中加入500μl去蛋白液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11,000 g离心2分钟,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入700μl漂洗液GW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),11,000 g离心60秒,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。
11、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗液GW,11,000 g离心60秒,倒掉废液。
12、吸附柱CG放回收集管中,11,000 g离心2分钟。
注:此步骤非常重要,其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
13、将吸附柱CG转入一个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB,室温放置2分钟,11,000 g离心2分钟。
注意:
a.洗脱缓冲液体积zuì好不少于50μl,体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内,pH值低于7.0会降低洗脱效率。
14、DNA产物-20℃保存。
DNA浓度及纯度检测:
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0%琼脂糖凝胶,使用λ/HindIII判断基因组的大小,完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时, OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间,如果洗脱时不使用洗脱缓冲液,而使用去离子水洗脱,比值可能偏低,但并不表明DNA纯度不高。
储存条件:室温,有效期12个月。
根据您的关注的细菌基因组DNA提取试剂盒,您可能还对以下产品有需求:
货号 | 名称 | 规格 |
BTN3672 | 植物DNA提取试剂盒 | 50次 |
BTN60805 | 中草药DNA提取试剂盒 | 20次 |
BTN130831 | 丝状真菌线粒体DNA提取试剂盒 | 15次 |
BTN60912 | 非酶RNA清除剂2.0 | 1.5mL |
BTN160692 | 内毒素清除试剂盒 | 1.5mL |
WE0206 | 磁珠法琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒 | 96次 |
ALH133 | 细菌基因组DNA快速提取试剂盒(柱式吸附) | 50次|100次|200次 |
关注细菌基因组DNA提取试剂盒,的同时,为您推荐更多您可能感兴趣的产品:
BTN90309 红细胞裂解液B型(流式细胞分析用) 250mL
BTN60501 一管式拭子DNA提取试剂盒 100次
BTN80926 柱式真菌DNA大量提取试剂盒(玻璃珠法) 4次
BTN111008 非酶多糖清除剂(DNA专用) 50次
BTN160692 内毒素清除试剂盒 1.5mL
BTN140405 细菌内毒素标准品(10EU/支) 10支
WE0176 血液基因组DNA提取试剂盒 可处理50ml血液|可处理200ml血液
WE0186 鼠尾基因组DNA提取试剂盒 50次
如果您觉得“RFT037 细菌基因组DNA提取试剂盒”描述资料不够齐全,请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从仪器交易网看到的,我们将给您最大优惠!)
本页链接:http://www.yi7.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8541503.html
已经有789位访客查看了本页.