WH0035 高纯质粒少量提取试剂盒

北京百奥莱博供应的高纯质粒少量提取试剂盒用于科学研究，我公司的高纯质粒少量提取试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括高纯质粒少量提取试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：高纯质粒少量提取试剂盒
英文名称：High Purity Plasmid mini Extraction Kit
产品货号：WH0035
产品规格：50次

本试剂盒在离心柱型质粒提取试剂盒基础上，增加了本公司特制的过滤柱CS，可在提取质粒的同时去除痕量蛋白及其它杂质，提取的高纯度质粒DNA可多至70μg，适用于需较大量质粒的动物细胞转染等分子生物学实验。

产品特点：
·高纯度：提取的质粒DNA可直接用于转染等高要求实验。
·快速：步骤少，操作简单，节省时间。
·高 效：可提取菌体85%以上质粒DNA。

质粒得率：

质粒类型	处理量	得率	质粒
高拷贝质粒	5-15ml	15-70μg	pTZ,pUC,pBS,pTG-T
低拷贝质粒	5-15ml	5-25μg	pBR322,pACYC及其衍生载体pSC101 及其衍生载体，SuperCos,pWE15

试剂盒组成：

组分	50T
平衡液BL	30ml
溶液P1	30ml
溶液P2	30ml
溶液P3	40ml
去蛋白液PD	30ml
漂洗液PW	15ml
洗脱缓冲液TB	15ml
RNaseA（10mg/ml)	300μl
过滤柱CS	50个
吸附柱CP4	50个
收集管（2ml)	100个

保存条件：室温（15-25℃)干燥条件下，可保存12个月；更长时间的保存可置于2-8℃。2-8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应先将试剂盒内的溶液在室温中放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min以溶解沉淀。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月。加入RNase A和BaiRed后的溶液P1应置于2-8℃保存，可稳定保存6个月。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2-8℃保存。
2．使用前先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有浑浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
3．注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。
4．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm （~13400×g )。
5．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液应在65-70℃预热。可以适当的延长吸附和洗脱的时间，以增加提取效率。
6．实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以zuì大限度激活硅基质膜，提高得率。
7．用平衡液BL处理过的柱子zuì好当天使用，放置时间过长会影响效果。

使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。

1．柱平衡步骤：向吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中）加入500μl的平衡液BL，12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
2．取5-15ml过夜培养的菌液加入离心管中，12000rpm （~13400×g )离心1 min，尽量吸除上清。
  注意：菌液较多时可以通过几次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中,菌体量以能够充分裂解为佳，过多的菌体裂解不充分会降低质粒的提取效率。
3．向留有菌体沉淀的离心管中加入500μl溶液P1 （请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
  注意：请务必彻底悬浮细菌沉淀，如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。
4．向离心管中加入500μl溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。
  注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5 min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。
5．向离心管中加入700 μl溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。12000rpm （~13400×g )离心10min，此时在离心管底部形成沉淀。
  注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。
6．将上一步收集的上清液分次加入过滤柱CS（过滤柱放入收集管中），12000rpm（~13400×g )离心2 min，小心地将离心后收集管中得到的溶液分次加入吸附柱CP4中（吸附柱放入收集管中），（如果过滤柱中有残余的液体说明步骤5吸取的上清中杂质过多，可以延长离心的时间；如果离心后收集管底部有少量的沉淀，尽量地吸取上清）。
7．12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
8．向吸附柱CP4中加入500μl去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
9．向吸附柱CP4中加入600 μl漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g )离心1 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP4放入收集管中。
  注意：加入漂洗液PW后，如果室温静置2-5 min，有助于更好地去除杂质。
10．重复操作步骤9。
11．将吸附柱CP4重新放回收集管中置于12000rpm （~13400×g )离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
  注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP4开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
12．将吸附柱CP4置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100-300 μl洗脱缓冲液TB，室温放置2 min，12000rpm （~13400×g )离心1 min将质粒溶液收集到离心管中。
  注意：洗脱缓冲液体积不应少于100 μl，体积过小影响回收效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解，洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用ddH2O做洗脱液，应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。为了增加质粒的回收效率，可将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置2 min，12000rpm（~13400×g )离心2 min，将质粒溶液收集到离心管中。

质粒DNA浓度及纯度检测：
1．得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。OD₂₆₀值为1相当于大约50 μg/ml双链DNA。
2．OD₂₆₀/OD₂₈₀比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用ddH2O，比值会偏低，但并不表示纯度低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值。

根据您的关注的高纯质粒少量提取试剂盒，高纯度质粒小量提试剂盒，您可能还对以下产品有需求：



名称：非冻型血液DNA保存液
货号：BTN60910
规格：250mL
本品是在室温条件下长期保存用于DNA提取的血液样品的保存液，它通过裂解细胞并抑制DNase的活性而达到长期保证DNA分子的完整性。

产品特点：
1. 保存时间长，可常温保存血液DNA 长达六个月，尤其适合于野外血液样品采集。
2. DNA 完整性好，纯化后长度在20-50 Kb之间。
3. DNA 无化学修饰，提得的DNA可用于酶切、电泳、Southern杂交和PCR等分子生物学实验。
4.适用于各种动物血液(包括禽类血液)。
5. 安全可靠，本产品无害。
6. 使用简单，直接把新鲜的血液样品与本产品混合即可。

储存条件：室温运输及保存，有效期两年。

使用方法：

一: 哺乳动物血液(包括人血液)
1. 将抗凝血(1-10mL)加入到适当容量的塑料离心管中。
2. 加入等体积的血液DNAhold，充分振荡混合均匀。
3. 常温闭光保存直到使用。
4. 提取DNA时，可以取出部分液体，用自备的蛋白酶K(终浓度为0.1mg/mL)37℃处理过夜，然后再用经典的酚/氯fǎng抽提+乙醇沉淀方法得到DNA。

二: 禽类血液
由于禽类血液有核细胞量远高于哺乳动物，血液的使用量很少，一般只有哺乳动物血液用量的1/100 到1/1000，所以需先用等体积的水将血液DNAhold稀释，然后直接将禽类血液加入。其余操作同上。

名称：血液细胞核DNA和线粒体DNA共提试剂盒
货号：BTN120810
规格：25次
本试剂盒是在本公司血液DNA提取试剂盒产品基础上开发的、专门用于从新鲜或冷冻的哺乳动物抗凝全血中同时提取细胞核DNA和线粒体DNA的试剂。

产品特点：
1.一份样品可以同时得到细胞核DNA和线粒体DNA，节约宝贵的实验材料。
2. DNA产率高。细胞核DNA产率一般为30-50μg/mL 新鲜血液，线粒体DNA产率约为1μg/mL 新鲜血液。陈旧血液DNA产率差别较大。
3. DNA 纯净，OD260/OD280在1.8-2.0 之间，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4.适用于哺乳动物血液，不适用于其他动物血液。
5. 所用试剂安全，健康环保。

试剂盒组成：

成分	规格
红细胞裂解液D型	250mL
溶液A	25ml
溶液B	2ml
溶液C	5ml
DNA 洗脱液2.0	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输和保存，保存期限一年。

使用方法：

一：白细胞核和线粒体的分离
1. 将3mL 用EDTA 抗凝管收集的新鲜血液转移到一个干净的15mL塑料离心管中。注意：zuì好使用新鲜血液。对于陈旧血液，由于冻凝过程中冰晶已经对细胞核膜和线粒体膜产生损伤，所以DNA 得率会大大减少，具体减少多少根据冻凝时间长短不同而不同。
2. 向血液中加入等体积(3mL)的D型红细胞裂解液；轻柔颠倒数次混匀，室温静置10分钟以裂解红细胞和白细胞的细胞膜，直至溶液变成清澈的红色。注意：D型红细胞裂解液一旦打开后，非常容易污染细菌，未用完的部分zuì好-20℃保存，下次使用前，要溶解后充分摇匀。
3.室温下1000 g离心10分钟沉淀白细胞核。
4.转移上清(含线粒体)到新的15mL塑料离心管中，注意不要触及白细胞核沉淀。
5.在白细胞核沉淀中加入3mL D型红细胞裂解液。轻柔颠倒数次混匀后，室温下1000 g离心10分钟以沉淀白细胞核。
6.转移上清(含线粒体)到第4 步所得的、已经含有上清的15mL塑料离心管中。
将白细胞核沉淀放置冰上，和即将准备好的线粒体一起用于DNA提取，也可以放置在-20℃待用。
7. 将汇集的含线粒体的上清于4℃下15000g离心30分钟。
8.小心移弃上清，小心将线粒体沉淀重悬在1mL D型红细胞裂解液中，然后转移到1.5mL塑料离心管中，15000g离心5分钟，移弃上清得到线粒体沉淀。
9. 用1mL D型红细胞裂解液洗涤线粒体2次(每次先重悬线粒体，再15000g离心5分钟得沉淀)。
10. 所得线粒体可以直接用于DNA提取，也可放置在-20℃待用。

二：DNA的提取(下面步骤为白细胞核DNA提取和线粒体DNA提取通用)
11.在白细胞沉淀或线粒体沉淀中加入0.5mL溶液A，用移液枪吹打数次混匀后再加入75μL溶液B，混匀后于55℃温育10分钟。注意：溶液将成浑浊状。
12. 再加入0.2mL溶液C充分颠倒混匀。
13.在4℃下13000g离心20分钟后，将上清(含DNA)转入一新的1.5mL塑料离心管中。
14. 加入两倍体积的自备无水乙醇充分震荡混匀后，室温13000 g离心5分钟，去尽上清。
15. 加入1mL 75%乙醇，充分混匀后室温13000g离心5分钟，去尽上清。
16. 重复上步一次。
17. 短暂离心，去尽残留溶液(此步十分重要，不要省略)。
18. 短暂晾干半分钟，加入适量DNA 洗脱液2.0 溶解DNA(对细胞核DNA，可加入500μL DNA 洗脱液2.0，对线粒体DNA，可加入50μL DNA 洗脱液2.0)。
19. 65℃保温15分钟以便彻底溶解DNA沉淀。溶解后的DNA可以立即用于后续的OD 检测、酶切、PCR或其他实验，也可以放置在-20℃长期保存。

关注高纯质粒少量提取试剂盒，高纯度质粒小量提试剂盒的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：


BTN130938 痰液采集器 1个
BTN60806 一步式细菌DNA提取试剂盒 50次
BTN170401 特异性显色基质鲎试剂盒 32次
WE0178 细菌基因组DNA提取试剂盒 50次
ALH136 细菌基因组DNA提取试剂盒 50次|100次|200次
ALH157 细胞凋亡DNA Ladder提取试剂盒 20次|50次
ALH174 口腔拭子基因组DNA提取试剂盒 50次
QN0892 全血基因组DNA提取系统(沉淀法) 50T|200T

如果您觉得“WH0035 高纯质粒少量提取试剂盒”描述资料不够齐全，请联系我们获取详细资料。(联系时请告诉我从仪器交易网看到的，我们将给您最大优惠！)
本页链接：http://www.yi7.com/com_bjbiolab01/sell/itemid-8541615.html
已经有805位访客查看了本页.