BTN71201 动物RNA提取试剂盒

动物RNA提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品用于科研试验，我公司专注于RNA提取纯化产品的研发、生产和供应，为您提供的动物RNA提取试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：动物RNA提取试剂盒(柱式Trizol)
英文名称：Animal RNA column extraction kit(Trizol)
产品货号：BTN71201
产品规格：50次

本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。

试剂盒特点：
1. 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
2. RNA 纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
3.一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
4.适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
5. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA 合成等实验。
6. 高于进口的柱式RNA提取产品。

试剂盒组成：

成分	50T
溶液A	50ml
溶液B	25ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA 洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。

1. 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
a)对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10 平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
b)对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1-5×106 悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
c)对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50-100mg 组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/ mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
d)对RNAhold 保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
2. 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯fǎng(1mL溶液A需0.2mL 氯fǎng)，振荡器上充分振荡混均30秒。
3. 12000rpm室温离心3～5分钟。
4. 将上清液(约0.6-0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μl上清液不取。同时吸取上清时zuì好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
5. 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
6. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
7. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 加0.7mL 通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
9. 加0.3mL 通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
10.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
11. 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 收集管中，加入50-100μL RNA 洗脱液。
12.室温12000 rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
13. RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA zuì好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA 专用上样液RNAload(操作详见RNAload 使用手册)，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
14. RNA 完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA 纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
A：不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议zuì好使用甲醛变性胶电泳和RNA 专用上样液(如RNAload)。
Q：如何确认和去处除污染的基因组DNA？
A：如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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名称：昆虫RNA柱式提取试剂盒
货号：BTN81220
规格：50次
本试剂盒是专门用于从富含多糖、糖蛋白、粘蛋白的动物样品(尤其是昆虫样品)中提取总RNA的试剂。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，处理一个样品只需要约十分钟。
2. RNA纯度高，平均 OD260/280一般都在2.0左右，能够有效去除大多数昆虫中的多糖污染。
3.适用于各种昆虫组织，每100mg组织能提取到20-30μg 总RNA。
4. 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
5.一站式，提供RNase-free的样品收集管。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50ml
溶液B	15ml
溶液C	50ml
离心吸附柱	50套
通用洗柱液	50ml
RNA洗脱液	10ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存(RNA洗脱液zuì好4℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1. 将50-300mg昆虫组织放入10-15mL塑料离心管中，加入1mL溶液A，然后用匀浆器匀浆5-20秒。匀浆时会产生泡沫，但不影响提取效果。也可以使用液氮砚磨法破碎昆虫组织，砚磨完后加入1mL溶液A。
注意：溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能会产生沉淀，使用前必须放在65℃水浴使沉淀彻底溶解并充分摇匀后再取用。
2. 将匀浆物或砚磨物转移至干净的1.5mL塑料离心管中(可以不必转移非液体的细胞碎片)。
3.在离心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自备氯fǎng，在振荡器上振荡30秒混匀，此时溶液呈均匀的乳浊状。振荡器振荡时必须使管底溶液震荡起来。
4.室温12000 rmp离心3～5分钟，两相间将有约5-10毫米厚的细胞破碎物。
5. 将上清液(约0.6mL)转移到另一干净的1.5mL塑料离心管中，下层有机相和中间层含有DNA、蛋白质和其他杂质，避免触及或吸取。zuì好留下100μl上清液不取。
6. 加入等体积的溶液C，充分颠倒混匀。
7. 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
8. 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000 rmp室温离心半分钟，弃穿透液。
9. 加0.7mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。
10. 加0.3mL通用洗柱液，室温12000 rmp离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
11.室温12000 rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的乙醇会影响RNA的使用。
12. 将离心吸附柱转移到RNase-free收集管中，加入50-100μl RNA洗脱液，室温放置1-2分钟。
13. 12000 rmp室温离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
14. RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。注意：大部分昆虫的28S RNA被切割成两个小的片段，彼此用氢键相连，所以在甲醛变性胶中，没有28S带出现(文献见：Eva C. Winnebeck，Craig D. Millar and Guy R. Warman，Why does insect RNA look degraded? Journal of Insect Science: Vol. 10：1-7)
15. RNA产量产率测定：将5-10μl RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
16. RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8-2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。

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