SY0267 动植物组织RNA稳定液

动植物组织RNA稳定液是高品质的RNA提取纯化产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于生化实验研究等领域，本品质量稳定，价位合理，需要动植物组织RNA稳定液等RNA提取纯化产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括动植物组织RNA稳定液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：动植物组织RNA稳定液
英文名称：Tissue Stabilizer
产品货号：SY0267
产品规格：100ml

RNA酶广泛存在环境中，很容易降解新鲜采取的动植物组织、血液、体液等样本中的RNA，从而使得研究人员在收集完新鲜样本需要做液氮速冻，或者立即进行RNA的纯化，给研究人员的户外工作带来很多不便。

动植物组织稳定液（Tissue Stabilizer）是专门开发用于稳定并保护采集样本内RNA的完整性，一种溶液，可迅速渗入组织，灭活内源RNase。具有以下特点：

1）操作其简便：只需要将新鲜组织切成合适大小（≤0.5 cm）的组织块，浸入5~10倍体积的本品中即可。2）稳定周期长：经本品浸渍的组织/细胞可在37℃保存1天，室温保存1周，4℃保存4周，-20℃/-80℃长期保存。3）下游兼容性广：几乎兼容于所有的RNA分离方法，如Total RNA Extraction Reagent总RNA抽提试剂，以及商业化的几乎所有RNA抽提试剂盒，包括离心柱抽提法，磁珠纯化法等。4）应用性广：可用于多种动植物组织如脑、心脏、肝脏、胰脏、肾脏、脾脏、睾丸、肌肉、植物的茎叶等的保存，还可用于酵母、组织培养细胞等。

注意事项

1）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2）经本品稳定液处理的样本还可做DNA的提取，甚至蛋白质的提取，但由于本品会变性蛋白质，因此不适合做天然蛋白的提取。
3）本本品稳定液室温保存过程中可能会产生一些沉淀，只需要在使用前放到37℃温育片刻，并摇晃使其重溶即可。
4）本本品稳定液仅适用于新鲜组织，不可用于冰冻组织。若需要保护冰冻组织内RNA的稳定性，可使用我司的本品-ICE冰冻动植物组织RNA稳定-过渡溶液，即可在将冰冻组织恢复为匀浆用的组织状态，并进行RNA抽提的过程中，维持RNA的稳定性。

操作流程

1. 样品处理：
A. 动物组织：本品稳定液不会破坏动物组织结构的完整性，因此，已经浸入本品的组织平衡一段时间后，可从溶液中取出，切成更小的组织块（≤0.5 cm大小），再重新放回本品稳定液中。另外，某些动物组织如骨头具有比较弱的液体渗透性，不适合用本品进行RNA保护。
使用：将组织切成合适的大小块（≤0.5 cm大小）后，加入5倍体积的本品稳定液。
B. 植物组织：植物组织天生具有的屏障如叶子表面的蜡层可阻碍本品稳定液的渗透，往往需要破坏这些屏障层从而允许溶液的浸透。对于许多柔软的植物组织如嫩叶，嫩茎等，本品可直接渗透且达到理想的RNA保护效果。
使用：将组织切成合适的大小块（≤0.5 cm大小）后，加入5倍体积的本品稳定液。
C. 组培细胞、白细胞：按照标准实验操作方法收集细胞（用PBS清洗1-2次）。之后往细胞内加入5～10倍体积的本品稳定液。
D. 酵母：收集大约108个细胞 (12,000 g，2 min)，弃上清。加入0.5～1 ml的本品稳定液。长期保存时应将酵母细胞置于本品稳定液中，4℃放置1小时。然后离心收集细胞 (12,000 g，5 min)，弃上清，再置于-80℃保存。

2. 样品保存：
A. -80℃保存：对于归档的样本建议-80℃保存，且效果zuì佳，样本可长期保存，-80℃条件下本品溶液也会结冻。
先需要让样本4℃浸透过夜，然后再转移到-80℃。如果中间需要做样本的融化，建议取出4℃浸透过夜的组织或者离心收集细胞，然后再冻存在-80℃。之后，样本可直接放在室温融化，之后重新冻上，不会造成RNA量的严重损失或者RNA完整性的明显破坏。
B. -20℃保存：也适用于归档样本的保存。样本不会在-20℃冻住，但可能会形成结晶。不会对后续RNA分离造成影响，样本可长期保存。
先需要让样本4℃浸透过夜，然后再转移到-20℃。之后，样本可直接放在室温融化。重新冻上后不会造成RNA量的损失或者RNA完整性的破坏。
C. 4℃保存：大部分样品放到本品溶液中，稳定保存1个月，不会有明显的RNA降解发生。
D. 室温（25℃）保存：建议低温环境保存。若条件不允许，请将本品稳定液于冰上冷却几个小时，然后将样品浸入此溶液中，室温稳定保存1周，不会有明显的RNA降解发生。
E. 37℃保存：纯化的RNA样本于37℃孵育24h，结构依然完整。

3. RNA提取：
注意：RNase失活的过程是可逆的，在样本使用前不要清洗掉本品稳定液。
A． 组织样本：直接用灭菌镊子从本品稳定液中取出组织块，然后用干净的吸水纸吸掉表面的液体。之后立即置于裂解液中匀浆。
B． 细胞样本：由于本品稳定液密度较大，此时需要使用大于普通介质的离心力。一般来说，保存在本品稳定液中的细胞能承受更高的转速，并维持细胞的完整性。大部分细胞能够承受离心速度 (5,000 g，5 min)，收集细胞沉淀。注意：由于不同细胞承受离心力会有差异，建议先用少量的细胞进行离心速度承受性的测试。
C．之后进行后续的RNA抽提，兼容各种常见的RNA抽提试剂，以及商业化的RNA抽提试剂盒。

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名称：水样病毒沉淀剂
货号：BTN101118
规格：10次

名称：细菌RNA提取试剂盒
货号：BTN51102
规格：100次
本试剂盒是在动物RNA提取试剂盒基础上根据细菌提取的具体情况改良而得。它基于异硫氰酸胍/酚/氯fǎng提取RNA原理，可用于包括E.coli、Campylobacter fetus、Pseudomonas aeruginosa、Rhodobacter sphaeroides等各种常见的革氏阴性细菌。如果需要提革氏阳性细菌(如Bacillus subtilis、Staphylococcus aureus等)的RNA，可以选择真菌RNA提取试剂盒。

试剂盒特点：
1. 操作简单快速，只要十分钟左右,可以全在室温下进行。
2. 所得 RNA 质量高,OD260/OD280一般在 1.9，不含基因 DNA污染。
3. 灵敏度高，可以从一个菌落中提取到普通电泳能够检测到的总 RNA。
4. 高于进口同类产品。

试剂盒组成：

成分	规格
细菌RNA提取试剂	100ml
说明书	1份

储存条件：常温运输，4℃保存，有效期一年。

使用方法：
1.在 1.5mL塑料离心管中离心收集0.2-1.5mL 新鲜细菌(注意:由于细菌RNA 半衰期十分短，所以，必须使用zuì新鲜细菌)，吸尽液体培养基，加入1mL细菌RNA提取试剂盒并用枪充分吹打，确保细菌全部裂解，没有块状物。
 如果使用菌落，则用接种环小心将其转移到装有1mL细菌RNA提取试剂盒的1.5 m塑料离心管中，用移液枪吹打均匀。在细菌数较少时，建议使 用助沉剂 RNApp以提高 RNA 回收率。
2. 加入0.2mL 氯fǎng，在振荡器上充分振荡混均 30秒(必须将管底的液体振荡起来，否则不能有效将DNA 打断和去除蛋白质)。
3. 12000～15000g室温离心3分钟。上清液无色，下层液呈篮色，中间为蛋白质。小心将上清液转移到另一干净 1.5ml塑料离心管中，上清液体积约为0.6mL。为避免触及中间层的DNA和蛋白质，建议分小量多次 吸取，并且只取 0.5mL，留 0.1mL左右。当细菌数量较少时，中间层十分松散，上清时很容易吸到下层有机相，需要更加小心。
4.在上清液中加入等体积的异丙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
5. 12000～15000室温离心 3-10分钟，RNA 将在管底侧面形成沉淀。
6.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
7.在离心管中加入1mL 75%乙醇，振荡器上振荡混均 30秒。
8. 12000～15000g室温离心 1分钟。
9.小心吸弃上清液，注意不要吸弃 RNA沉淀。
10. 重复第 8 到第 10 步一次。
11. 短暂快速离心，用移液枪小心吸弃残留液(约50μl)。
12. 短暂放 1-2分钟后加入适量 RNA 溶解液使 RNA沉淀溶解，可以立即使用或存放于-80℃长期保存。
13. RNA 完整性的电泳检测：
 如果需要做 Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子(BioTechniques，28：414，2000)。如果是简单检测，可以使用TAE或百奥莱博的SuperBuffer-2 DNA/RNA 两用快速电泳液，但文献报道必须使用变性上样液(BioTechniques，9：558，1990)。普通 DNA上样液不含变性剂，也没经过去 RNase处理，所以zuì好不要使用。 尤其需要注意的是不要使用TBE进行RNA电泳，因为TBE 所含硼酸是研究多糖的经典方法----硼酸络合法中的关键成分，硼酸通过与RNA 核糖中的羟基发生络合反应，形成RNA分子内或RNA分子间的络合复合物，使同样长度的RNA 具有不同的泳动速度，电泳条带弥散，同时有大的RNA 络合复合物迟留在加样孔中(一般会误以为是基因组DNA污染)。RNA分子内或RNA分子间的络合物的形成的多少和比例又与硼酸与RNA的数量比例有关，而RNA样品中污染的其他多糖(如植物中提取的RNA)也会参与此反应，使硼酸对RNA电泳的影响更复杂，所以TBE 对RNA电泳的影响没有规律性和重复性。有的样品可以使用有的又不行，zuì好是避免使用。
 由于细菌细胞中70-80%的RNA为rRNA，后者又由23S(约3700nt)，16S(约1700nt)和5S(约100nt)三种组成，所以变性胶电泳后应该在UV下看见三条清晰的rRNA带。由于核酸长度与结合 EB的数量成正比(当然还与RNA的二级结构有关，双链部分结合能力比单链部分强)，所以23S rRNA条带的荧光强度一般比16S rRNA条带的荧光强度强2倍。如果这两条rRNA 带不清晰或比例小于此范围则表示 RNA 有降解(因为大的RNA 被酶降解的可能更大)。
14. RNA产量产率测定：
 将5-10μl RNA 溶于TE缓冲液中(pH7.5-8.2 之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出 RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出 RNA的产量和产率。注意不要将RNA 稀释在 DEPC 水中检测 OD260和OD280，否则光吸收比在 TE中测得的低 10%-15%，因为核酸光吸收跟溶液 pH相关，而 DEPC 水中的DEPC高压分解后产生的CO2与水反应生成碳酸，使溶液 pH降低进而降低 RNA的光吸收。
15. RNA 纯度测定：
 无污染的总 RNA的OD260/OD280一般在 1.8-2.1 之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，OD260/OD230一般在2.0-2.3 之间，如果低于或高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质或多糖的污染，但一般不影响 RT-PCR等反应。蛋白质污染可以通过酚/氯fǎng抽提一次然后酒精沉淀去除，DNA和多糖污染可以分别用百奥莱博的DNAScavenger和PS Scavenger去除。

疑难解答：
Q：上样孔里的红色荧光物一定是污染的基因组DNA吗？
A：不是。用 TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳 RNA时容易产生此现象，百奥莱博初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA 通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加 RNase处理后，这些红色荧光物一般会消失。为避免此现象，建议zuì好使用甲醛变性胶电泳。如果需要使用非变性胶，也必须在上样前使RNA变性。使用百奥莱博优化的上样/变性/染色三用溶液 RNAload可以使 RNA在非变性胶上电泳时也有较好分辨率。使用非变性胶时，可以使用TAE或超快电泳液SuperBuffer-2，zuì好不要使用TBE缓冲液，因为TBE中的硼酸能与RNA的多羟基形成复合物，RNA 很难形成锐利的条带。
Q：如何确认和去处除污染的基因组 DNA？
A：如果怀疑有 DNA污染，可以用 RNase处理 RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组 DNA污染。进一步确认可以使用 PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用非酶的DNA 去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。

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货号	名称	规格
BTN160907	植物RNA提取试剂盒2.0(无氯fǎng柱式提取)	50次
BTN80104	一站式miRNA柱式提取试剂盒	50次
BTN90904	膜结合DNA清除试剂盒	50次
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WE0404	RNA样本保存液	100ml|500ml

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