WE0123 热启动DNA聚合酶

热启动DNA聚合酶的品牌是百奥莱博，是优质的核酸扩增(PCR)产品，本制品用于科研目的，本品质量稳定，价位合理，需要热启动DNA聚合酶等核酸扩增(PCR)产品的客户，请到我公司官网联系我们。...

特别提示：包括热启动DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：热启动DNA聚合酶
英文名称：SuperStar DNA Polymerase
产品货号：WE0123
产品规格：500U|2500U

  本产品是一种采用zuì新封闭技术的Taq DNA Polymerase，适用于HotStart PCR。在70℃以下，酶的活性中心被完全封闭，有效抑制了聚合酶活性，并能够在低温条件下有效抑制引物的非特异性退火及引物二聚体引起的非特异性扩增。在95℃条件下孵育5分钟后，酶的部分活性得以释放。随着热循环的不断进行，剩余的酶活会源源不断地释放出来，这就使得此酶克服了常规Taq酶容易出现平台期的弊端，其扩增效率大大提高。
  本品进行PCR扩增时，PCR产物3"末端附有一个“A”碱基，可直接用于T/A克隆。本产品具有扩增速度快、特异性好、稳定性好的特点，主要应用于对扩增产物要求量大的PCR和RT-PCR反应。

产品组成：

组份	500U	2500U
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	100μl	5×100μl
10×PCR Buffer	1.8ml	5×1.8ml

注意：本产品的10×PCR Buffer中含有15 mM镁离子。

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板/引物，在74℃，30分钟内，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸性不溶物质所需的酶量定义为1个活性单位(U)。

质量控制：
1、经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测其纯度大于99%；
2、经检测无外源核酸酶活性；
3、PCR方法检测无宿主残余DNA；
4、能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因。

使用方法：
以下举例为以人基因组DNA为模板，扩增1 kb的片段的PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。

1、PCR反应体系

试剂	50μl反应体系	终浓度
10×PCR Buffer	5μl	1×
dNTP Mix，10 mM each	1μl	200μM each
Forward Primer，10μM	2μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	2μl	0.4μM
Template DNA	<0.5μg	<0.5μg/50 μ l
SuperStar DNA Polymerase，5 U/μl	0.5μl	2.5 U/50μl
ddH2O	up to 50μl

注意： 可以在室温下配制反应液，zuì好将试剂置于冰上。引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

2、PCR反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	5 min
变性	94℃	0.5-1 min	25-35个循环
退火	50-68℃	0.5-1 min
延伸	72℃	1 min
终延伸	72℃	10 min

注意：
1)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品中所包含的SuperStar DNA Polymerase的延伸速率为1 kb/min。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

根据您的关注的热启动DNA聚合酶，您可能还对以下产品有需求：



名称：25mM氯化锰溶液(PCR级MnCl2溶液)
货号：BTN130307
规格：5mL
本产品为专门用于易错PCR的MnCl2水溶液，浓度为25mM，可用于调节MnCl2的zuì佳浓度。由于Mg2+在PCR过程中可以稳定非互补的碱基对，Mn2+能够降低聚合酶对模板的特异性，因而调整两种离子的浓度，可获得不同突变频率的多样性文库。

氯化锰分子量为125.8，CAS号为7773-01-5，水合氯化锰外观为玫瑰色单斜晶体；无水氯化锰外观为桃红色结晶。密度为2.977g/cm3。熔点是650℃。在高于熔点温度下升华。沸点1190℃。易溶于水，溶于醇，不溶于醚。

储存条件：低温运输、-20℃保存，有效期一年。

名称：miRNA荧光定量RT-PCR检测试剂盒
货号：BTN131042
规格：25次
本试剂盒采用SYBR Green I 嵌合荧光染料法的原理来进行miRNA荧光定量PCR检测。本产品是专门为miRNA定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量PCR检测试剂。2×miRNA qPCR Mix包含有Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR增强剂等所有PCR所需要的成分。miRNA qPCR Mix中所含的荧光染料SYBR Green I可以与所有的双链DNA结合，使该产品可用于不同靶序列的检测而不需合成特异性标记探针。其中的Taq DNA polymerase是经化学修饰的热启动酶，配合独特的缓冲体系，使反应特异性更好，灵敏度更高，并能在更广的范围内对miRNA进行准确定量。

产品特点：
1. 简便、快捷完成miRNA的检测。
2. 检测通量高，只需zuì少的RNA样本，即可同时进行多种目标miRNA的检测。
3. 检测特异性好，独特的miRNA引物设计技术及其优化的反应体系避免了非特异性扩增、特别是Pre-miRNA的污染。
4. 检测分辨率高：该系统能分辨单碱基差异的miRNA。
5. 检测灵敏度高：可在低至pg级的总RNA中检测到特异表达的miRNA。

试剂盒组成：

成分	规格
2×miRNA qPCR Mix	0.75ml
Reverse Primer(10μm)	30μl
RNase-Free Water	1ml
miRNA cDNA链合成试剂盒	25T
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：

一、miRNA cDNA链合成
请参见miRNA cDNA 链合成试剂盒产品使用说明书。

二、miRNA荧光定量检测
1.室温融化2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer(10μm)。
2. 使用时请将2×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经短暂离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。
3. 按照下表组分配制荧光定量PCR反应体系：

试剂组份	体积
2×miRNA qPCR Mix	25μl
Forward Primer(自备)	1μl
Reverse Primer	1μl
miRNA 链cDNA	xμl
RNase-Free Water	至50μl

4. 建议反应程序设置如下：

循环	温度	时间
1×	95℃	10min
40～45×	95℃	15s
	60℃	1min
溶解曲线分析	根据PCR仪要求设定

注意事项：
1. miRNA 链cDNA的加入量不要超过Real time PCR 体积10%。
2. 对于特殊的检测体系，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA的丰度适当的稀释cDNA(稀释10倍或者100倍)。
3. 2×miRNA qPCR Mix中含有SYBR Green I和ROX染料，保存本产品或配制PCR反应液时应避免强光照射。

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