WE0296 一步法Western专用封闭液

一步法Western专用封闭液的品牌是百奥莱博，是优质的蛋白质研究产品，本制品用于科研目的，我公司的一步法Western专用封闭液品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括一步法Western专用封闭液在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：一步法Western专用封闭液
英文名称：One Step Western Blocking Buffer
产品货号：WE0296
产品规格：100ml

  Western Blot实验中，为防止印迹膜与检测系统中的蛋白成分(如抗体IgG等)发生非特异性吸附，导致实验结果不清晰，通常在进行一抗孵育前需预先对印迹膜上的非特异结合位点进行封闭。本产品以奶粉为基础，采用独特配方，专用于百奥莱博一步法WB检测中的封闭步骤，可快速地封闭膜上多余的结合部位，减少非特异结合情况的产生，降低背景，适用于各种转印膜的封闭，操作方便快捷。另外，本产品特别添加了蛋白稳定剂，可保证每次实验封闭效果稳定可靠。

注意事项：
1、每次使用时，必须保证封闭液将印迹膜完全浸没，以免影响封闭效果。
2、本产品含有防腐剂，操作时请佩戴手套进行防护。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：

1、本产品无需稀释，开盖即用。
2、目的蛋白转移完毕后，将印迹膜放入容器中，加入适量One Step Western Blocking Buffer。
3、室温孵育5分钟。
4、封闭结束后弃去封闭液，进行一步法Western Blot后续操作。

储存条件：2～8℃

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货号	名称	规格
BTN131071	牛血清γ球蛋白标准品(2mg/mL)	1mL
BTN81205	一站式Tricine-SDS-PAGE套装	30次
BTN100811	质谱兼容型蛋白银染试剂盒	10次
WE0316	通用型免疫组化试剂盒(鼠兔源一抗)	3ml
SY0317	SDS裂解液	100ml
SY0408	30ml重力层析空柱	1套
QN1067	磷酸化蛋白提取试剂盒	50T|100T

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名称：谷胱甘肽琼脂糖(GST-琼脂糖)
货号：BTN120101
规格：2mL
谷胱甘肽琼脂糖亲和基质是结合谷胱甘肽(GSH)的4％浓度的交联珠状琼脂糖基质，可用于结合和分离纯化带有谷胱甘肽硫转移酶(GST)等谷胱甘肽亲和性蛋白质分子，特别是重组表达的GST融合蛋白。可用于带有GST标签的重组蛋白的纯化和GST pull-down实验。

产品特点：
1．特异性高，不与非GST融合蛋白相结合。
2．高结合量，每毫升基质可结合5～10mg重组GST融合蛋白。
3．高度灵活，可填装任意品牌的柱子。

储存条件：低温运输，4℃保存(切勿冻结)，有效期一年。

名称：辛甲基β葡糖苷
货号：BTN131044
规格：1g
本产品是一种广泛用于溶解膜蛋白的非离子型去垢剂。低分子量，可通过透析去除。

储存条件：常温运输和保存，有效期一年。

名称：BCA蛋白定量试剂盒
货号：WE0276
规格：500次微孔板(50管次)
  BCA蛋白定量法是目前广泛使用的蛋白定量方法之一。本产品是基于BCA(Bicin-choninic Acid)法研制而成，实现了对蛋白质进行快速、稳定、灵敏的浓度测定。其原理是在碱性环境下蛋白质分子中的肽链结构能与Cu2+络合生成络合物，同时将Cu2+还原成Cu+。BCA试剂可敏感特异地与Cu+结合，形成稳定的有颜色的复合物。在562 nm处有高的光吸收值，颜色的深浅与蛋白质浓度成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白质的含量。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)溶液作为蛋白质标准品溶液，测定范围为20～2000μg/ml。

试剂盒组成：

组成	规格
BCA-A	2×50ml
BCA-B	3ml
BSA Standard Solution(2mg/ml)	2ml

保存条件：BSA Standard Solution：2～8℃，其它组分：室温

注意事项：
1、本产品可以采用分光光度计(试管检测法)或者酶标仪(微孔检测法)测定蛋白浓度。
2、建议每次测定蛋白样品时，绘制标准曲线，以获得准确数据。
3、BSA标准品的稀释液需与待测样品的稀释液一致(可用1×PBS或0.9%生理盐水稀释)。
4、如待测样品中含较多的干扰物质(具体见附表1)，可采用Bradford法蛋白定量试剂盒(WE0275)或其他蛋白定量产品。

使用方法：
1、稀释BSA标准品：用与待测蛋白样品相一致的稀释液按下表稀释BSA标准品。

管号	稀释液用量(μl)	BSA标准品用量(μl)	BSA标准品zuì终浓度(μg/μl)
A	0	100	2
B	200	200	1
C	200	200(从B管中取)	0.5
D	200	200(从C管中取)	0.25
E	200	200(从D管中取)	0.125
F	200	200(从E管中取)	0.0625
G	200	0	0(空白)

2、配置BCA工作液：
1)计算BCA工作液总量：
BCA工作液总量=(BSA标准品样本个数+未知样本个数)×复孔数×每个样本BCA工作液体积
举例：BSA标准品样本个数为7个，未知样本个数2个，复孔数3个。
试管检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×2ml/每个样本工作液体积=54ml
微孔检测法：
BCA工作液总量=(7个BSA标准品样本+2个未知样本)×3个复孔×200μl/每个样本工作液体积=5.4ml
2)根据计算出的BCA工作液需要总量，将BCA-A和BCA-B按照50:1的体积比，配制BCA工作液，充分混匀。
注意：
a. 由于加样可能存在误差，建议配制BCA工作液时，多配制1-2个孔。
b. 新配制的BCA工作液室温密封条件下可稳定保存24小时。

3、定量检测
①试管检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各100μl分别加到作好标记的试管中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)向每个试管中各加入2ml BCA工作液，充分混匀，37℃水浴中孵育30分钟 ，将各管冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用分光光度计在562 nm处，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
② 微孔检测法(蛋白浓度检测范围：20-2000μg/ml)
1)按上表，将稀释好的A-G BSA标准品和待测蛋白样品(原液或稀释液)各25μl分别加到作好标记的96孔板微孔中。推荐每个测定的样本做2-3个平行反应。
2)每孔加入200μl BCA工作液，充分混匀，盖上96孔板盖，37℃孵育30分钟，冷却至室温，须在3-5分钟内完成检测。
3)用酶标仪在540-590 nm范围内，测定每个样品及BSA标准品的吸光值，同时做好记录。
4)绘制标准曲线，计算样品中的蛋白浓度。
注意：
a. BCA法测定蛋白浓度时，吸光值会随着时间的延长不断加深。因此所有样品测定需在3-5分钟内完成，否则会影响蛋白定量的准确度。
b. 建议以去除背景值后的吸光值读数绘制标准曲线。
c. 由于操作误差导致标准品读数严重偏离线性曲线的应舍去。
d. 未知样品浓度可以从标准曲线方程中计算得出, 实际浓度需要乘以样品的稀释倍数。
e. 如果得到的蛋白浓度不在检测范围内，请重新稀释样品后再次测定。

4、BCA蛋白定量分析结果举例：
微孔板检测法结果

蛋白浓度(μg/μl)	原始吸光值	去除背景值后的吸光值
0	0.086(背景值)	0.000
0.125	0.123	0.037
0.25	0.280	0.194
0.5	0.551	0.465
1	1.068	0.982
2	2.000	1.913

附表1. 干扰物质表

化合物	耐受浓度
缓冲液
乙酸盐	0.2M
甘氨酸	1M
HEPES	0.1M
MES	50mM
MOPS	50mM
Na+-柠檬酸	＜1mM
PIPES	50mM
磷酸钠	0.1M
乙酸钠	0.2M pH 5.5
TES	50mM
Tris	0.1M
盐类
硫酸铵	干扰
NaCl	1M
尿素	3M
性化合物
DMSO	5%
甘油	10%
去垢剂和变性剂
Brij35	1%
CHAPS	1%
盐酸胍	4M
NP-40	1%
辛葡糖	1%
SDS	1%
Triton X-100	1%
糖类
葡萄糖	10mM
蔗糖	1M
螯合剂
EDTA	10mM
还原剂
β-巯基乙醇	50μM
DTT	1mM
其他
脂类	干扰
HCl/NaOH	0.1M

储存条件：2～8℃

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