HR7812 脂肪组织蛋白提取试剂盒

脂肪组织蛋白提取试剂盒由北京百奥莱博供货并提供相关技术服务支持，本品仅用于生物化学研究方面，我公司专注于蛋白质研究产品的研发、生产和供应，为您提供的脂肪组织蛋白提取试剂盒质量可靠，批间差小，且价格公道，热切盼望您选购我们的产品。...

特别提示：包括脂肪组织蛋白提取试剂盒(脱脂过滤柱)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：脂肪组织蛋白提取试剂盒(脱脂过滤柱)
英文名称：Adipose tissue protein extraction kit (defatted filter column)
产品货号：HR7812
产品规格：50T|100T

脂肪组织蛋白提取试剂盒适用于从脂肪组织和各种脂肪含量高的实体组织和细胞，如脂肪细胞、脂肪肝细胞、脑、脂肪、脂肪肝脏、结缔组织、胸腺组织等动物组织中提取可溶性总蛋白。提取过程简单方便，可在1小时内完成。
该试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。本试剂盒含有的独特配方能够溶解细胞膜包括细胞质膜和核膜。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号的试剂盒(相关产品HR0165)。也可以将zuì后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理(相关产品HR0389)。
本试剂盒所配蛋白脱脂肪离心柱可以用来滤除蛋白质溶液中的液态脂滴，对蛋白质无吸附。蛋白脱脂柱可以重复利用。
我们可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、液体、土壤等不同样本的蛋白提取试剂盒，包含用于非双向电泳和双向电泳等不同下游应用的试剂盒以及含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒，专用于蛋白质谱检测的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒可供选择。我公司还可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体等不同细胞器的提取试剂盒。

储存条件：蛋白提取液2-8℃保存；蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白脱脂离心柱室温保存。
【注】：
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
有效期：一年。
使用前请仔细阅读产品说明书
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
1．正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得zuì佳实验效果。
2．螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
3．禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
4．样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
5．zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
6．实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
1．使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2．将蛋白提取的时间缩短至30分钟-1小时。
3．含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
4．紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
5．蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。
该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
●离心机、离心管、吸头 ● 振荡器、涡旋混匀器、移液器 ●冰箱、冰盒
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1×))：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM
NaCl和3mM KCl)
使用注意事项：
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

使用方法：
1．提取液制备：
每500μl蛋白提取液中加入2μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取100-200mg组织样本剪碎，加入500μl蛋白提取液A，用组织匀浆器/匀浆机充分匀浆。
【注】：
● 如果组织样品很细小，可以剪碎后直接加入提取液振荡15分钟，可以不用匀浆器。
● 也可用液氮研磨的方法，常用操作即可。如需要具体方法可以联系本公司索取详细资料。
3．将组织匀浆吸入一预冷的干净离心管中，在4℃条件下振荡15-30分钟。
【注】：
●用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。
● 没有振荡条件可以不振荡，置4℃静置即可，稍微延长时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
4．将含有脂肪的上清吸入蛋白脱脂离心管中，套上液体收集管，在4℃，10000-12000g条件下离心10-15分钟。
【注】：
●蛋白脱脂柱重复利用，一般一个柱子可以用5-20次。
● 提取液液面有大量脂肪层时，建议可以先用移液器吸除脂肪层，有利于延长脱脂柱使用寿命，增加使用次数。
5．将液体收集管中的液体吸入另一干净离心管，在4℃，12000-16000g条件下离心5分钟。
6．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到蛋白样品。
7．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
●蛋白样品－80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。
常见问题分析：
●蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。zuì好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
●用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
● 提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。

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名称：细菌膜蛋白质微量提取试剂盒
货号：BTN100929
规格：50次
本试剂盒是基于超速离心的快速提取细菌膜蛋白的试剂盒。其原理是裂解细胞后，通过超速离心分离出细胞膜和附着的蛋白质。

产品特点：
1.一步式分离细胞膜和膜蛋白，密度梯度离心法简单快捷。
2. 膜蛋白纯度高，能够去除各种胞浆蛋白的污染，也能去除松散附着在细胞膜上的蛋白，所得膜蛋白主要是整合蛋白。
3. 膜蛋白完整性好，主要是由于实际中有抑制蛋白酶成分。
4. 回收效率高，一般能得到相当于总蛋白量6%的膜蛋白。
5.可用于E.coli，S.typhimurium，K.aerogens，P.aeruginosa，C.crescentus等细菌。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	125ml
溶液B	25ml
溶液C	250ml
DNase I干粉	3.5mg
说明书	1份

储存条件：低温运输和保存，DNase I 需要低温保存。有效期一年。

使用方法：
准备：次使用本试剂盒时需要将所有DNase I干粉倒入溶液B中，轻柔颠倒使DNase干粉溶解。未用完的部分需要放-20℃保存，zuì好在一个月内完，否则DNase 将逐渐失去活性。此外，zuì好在实验前1小时将溶液B冰浴预冷。

用法一：小量制备(主要用于上样量比较小的SDS-PAGE电泳等实验)
1．收集20-40mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入2mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入0.5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有20-40mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到新的10mL-15mL塑料离心管中(如Beckman Optima 台式超速离心机离心管)，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入5mL预冷的溶液C，轻柔颠倒混匀后冰浴放置30-60分钟。其间可以轻柔颠倒混匀3-5次。
8．用 Bechman Optima 台式超速离心机115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入0.2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Optima 台式超速离心机 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致，否则有可能得不到沉淀。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存，也可以直接加入0.1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×SDS-PAGE上样液中，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度将在1mg/mL左右。

用法二：大量制备(主要用于上样量比较大的2D电泳等实验)
1．收集200-400mL 过夜培养的细菌饱和培养液(OD420在1.5左右即可)，2500 g室温离心10分钟后弃上清。
2．加入20mL溶液A，轻柔吹打，将细菌重悬于溶液A中。
3．2500 g室温离心10分钟后弃上清。
4．加入5mL溶液B(必须已经提前加入了DNase I干粉)，轻柔吹打使细菌重悬。注：如果细菌起始量没有200-400mL，溶液A的用量可以等比例降低。重悬在溶液A中的细菌可以放-80℃长期保存。
5．用超声或French Press方法裂解细胞。如果用French Press方法，则需要处理至少两次，每次的压力为9.65×10E7(=14000 psi)。注意：不论用哪种裂解方法，都必须在显微镜下检查细菌是否已经裂解，否则还需要重复细菌裂解过程，直到80%以上的细菌都裂解为止。
6．2500g室温离心8分钟后小心转移上清到干净的玻璃烧杯中，弃沉淀(未破裂细胞)。
7．在上清(细菌裂解液)中加入50mL预冷的溶液C，轻轻在冰浴中搅拌混匀30-60分钟。注：可以在大烧杯中装冰，然后将装有样品的小烧杯放入，在放入干净的搅拌子，以zuì低速度搅拌。
8．用 Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
9．小心移弃上清，在沉淀中加入2mL溶液A，充分吹打混匀。
10．用Beckman Type 55.2 Ti转头 115000g 4℃离心60分钟。也可以使用其他冷冻超速离心机，但离心力应该一致。
11．小心移弃上清，所得沉淀放-20℃长期保存或溶解在1mL自备的，跟后续实验兼容的缓冲液(如1×等电点电泳上样液，可从本公司购买)，所得膜蛋白的浓度在1mg/mL左右。

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