HR0593 线粒体超氧化物染色试剂盒-M13

线粒体超氧化物染色试剂盒-M13的品牌是百奥莱博，是优质的细胞组织染色产品，本制品用于科研目的，本产品质量好，且具价格，深为用户称道，了解更多线粒体超氧化物染色试剂盒-M13等细胞组织染色产品请联系我司咨询订购。...

特别提示：包括线粒体超氧化物染色试剂盒-M13在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：线粒体超氧化物染色试剂盒-M13
产品货号：HR0593
产品规格：30T|50T

M13线粒体超氧化物染色/检测试剂盒是利用M系列探针进行线粒体超氧化物特异性染色的试剂盒。本试剂盒中的M13线粒体超氧化物染色探针为红色荧光标记的线粒体探针，具有510/580nm 的zuì大激发/发射波长。
M13线粒体超氧化物染色探针是一种细胞渗透型的对活细胞中的线粒体体进行选择性染色的一类荧光染料，该探针可以选择性标记线粒体，包含标记线粒体的弱巯基反应性的氯甲基官能团。只需简单孵育细胞，即可穿过细胞膜并直接聚集在活性线粒体上。一旦进入线粒体后，快速被超氧化物氧化，并产生红色荧光。M13线粒体超氧化物染色探针只可被超氧化物氧化，而不被其他活性氧类(ROS)和活性氮类(RNS)氧化。氧化产物结合核酸后，可产生大量红色荧光。

储存条件：染料-20℃避光保存；避免反复冻融；稀释液2-8℃保存。
按每个样用200μl染料计，试剂盒可以做30-150个样或60-300个样；
按每个样用100μl染料计，试剂盒可以做60-300个样或120-600个样。
有效期：六个月。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要zuì新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● HBSS ● 离心机 ●荧光显微镜/激光共聚焦显微镜

使用方法：

使用注意事项：
● M13染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO 溶液集中于管底。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定zuì佳条件。以下方法仅供参考。
●染色后立即进行分析。

1．染色工作液配制：
根据样本数量，用染料稀释液将M13荧光染料10倍稀释，再用HBSS缓冲液或者相应的培养基10-50倍稀释，配制成染色工作液。
【注】:
● 也可以直接用HBSS 等缓冲液或相应的培养基稀释M13染料母液至所需浓度。
● 建议收到产品后，根据单次使用量，对母液进行小量分装，每次使用一管，试剂-20℃避光冻存，一年稳定。
● 开始实验前，使用培养基或HBSS缓冲液稀释储存液到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的zuì佳工作浓度，一般染色终浓度100-500倍稀释。
● 为了降低过度加载染料导致的线粒体毒性，在不影响实验结果的前提下应尽可能低浓度染色。
● 工作液现配现用。
● 为了降低探针加载过度可能引起的假阳性，建议在不影响染色效果的情况下尽量使用低浓度。
2．细胞染色
2.1对于贴壁细胞
1)培养皿/培养板准备细胞样本。
2)待细胞生长到合适丰度，吸除培养液，加入适量37℃预热的含探针工作液。于生长状态下孵育10分钟～30分钟(具体孵育时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
【注】:
● 也可以将细胞置于培养皿中的盖玻片上，加入合适培养基，使其爬片生长。
3)利用新鲜培养基替换上述染色液。
【注】:
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。
4)荧光显微镜(含合适滤片)或激光共聚焦显微镜、荧光酶标仪下观察。zuì大激发/发射波长为510/580nm。
2.2对于悬浮细胞
1)离心，吸除上清。
2)利用37℃预热的探针工作液重悬细胞，于生长状态下孵育30分钟～2小时(具体时间需根据细胞类型而定，需预实验优化)。
3)离心，吸除染色液，加入新鲜培养液重悬细胞。
4)置于荧光镜下观察。或流式细胞仪、荧光酶标仪检测。zuì大激发/发射波长为510/580nm。
【注】:
●对于悬浮细胞，也可将细胞贴附于经细胞粘合剂处理过的盖玻片上，然后使用类似于贴壁细胞的方法进行染色。
● 如果需要盖玻片上固定化的细胞，那么可在铺片前可以先用多聚赖氨酸(poly-D-lysine)包被载玻片或盖玻片。
● 若染色不够充分，建议增加染料浓度或延长染色时间。

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名称：无醇苏木素染液
货号：SNM365
规格：500ml×1|250ml×1|50ml×1

名称：抗酒石酸酸性磷酸酶染液
货号：KFS106
规格：20T
检验原理：
在酸性的缓冲液中，细胞内酸性磷酸酶催化底物水解，其生成物进而与一种稳定的重氮盐偶联，生成不溶性的偶氮染料沉淀，当底物中存在酒石酸时，该反应只出现在特异性细胞中。

用途：
抗酒石酸酸性磷酸酶（TRACP）染色可以了解破骨细胞的功能状态，并对毛细胞性白血病有助诊断，本染液可用于石蜡切片、血液、骨髓及培养细胞的涂片、爬片、以及冰冻切片的细胞染色。

储存：4℃，有效期6个月。

名称：Propidium Iodide染色液(PI,碘化丙啶)
货号：HR8318
规格：100T
PI染色液可用于细胞凋亡检测，也可用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色，染色后可用荧光显微镜检测或流式细胞仪检测。Propidium Iodide是一种DNA 结合性染料，其激发和发射波长分别为488nm和630nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。也可采用流式细胞仪利用细胞形态上的改变影响它们的光散射特性改变进行分析，还可与RNase A结合进行细胞周期分析。

储存条件：4℃避光保存。长期保存-20℃避光保存。
有效期：六个月。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● Propidium iodide是光敏物质，请注意避光。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● zuì好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

使用方法：

使用注意事项：
●本染色液用于细胞染色分析，也可用于石蜡切片、冰冻切片、细胞涂片的检测。石蜡切片用常规方法脱蜡、分化、冰冻切片用冰丙酮固定后检测。以下以培养细胞的荧光显微镜检测为例，细胞染色可用预冷的70%的乙醇固定，4℃，1-2小时，也可不固定，其他方法请参阅相关资料。
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后请尽快检测。
●染色时间根据不同样本的实际染色结果做相应调整。
● PI有毒，操作时要戴上手套。
● 流式检测细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA 结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。
荧光显微镜观察
1．收集细胞，PBS洗涤细胞一次，2000rpm离心5分钟，用PBS重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；
2．取100μl细胞悬液，加入2-10μl PI染液，轻轻混匀；
3．4℃避光放置5min后，滴加于载玻片上，加盖玻片；
4．荧光显微镜检测。
流式检测：
1．收集细胞，PBS洗涤细胞一次，2000rpm离心5分钟，用PBS重悬细胞，调整细胞浓度约为106个/ml；
2．500μl细胞悬液中加入5μl PI染液；
3．4℃避光放置30min；
4．流式细胞仪检测。

结果分析：
置于荧光显微镜下用488nm 激发光观察结果：正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。
流式检测用氩离子激发荧光，激光光波波长为 488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关；在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0 期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0 期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。

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