SYA488 结核杆菌单重荧光PCR检测试剂盒

北京百奥莱博供应的结核杆菌单重荧光PCR检测试剂盒用于科学研究，我公司的结核杆菌单重荧光PCR检测试剂盒品质上佳，经过多年的开发生产，已然非常成熟，欢迎广大新老客户订购。...

特别提示：包括结核杆菌(TB)单重荧光PCR检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：结核杆菌(TB)单重荧光PCR检测试剂盒
产品货号：SYA488
产品规格：48次/盒|96次/盒

一、简介
本试剂盒用一对结核杆菌特异性引物，结合一条特异性探针，用荧光PCR技术对结核杆菌核酸进行体外扩增检测，用于临床上对可疑感染者的病原学诊断。

二、用途
该试剂盒适合于检测外周血等样本中结核杆菌DNA，用于结核病等疾病的辅助诊断，其检测结果仅供临床参考。

三、试剂盒组成(40T/Kit)
组份 数量 规格
TB反应液(TB-qPCR MIX) 1管 560μL/管
核酸提取液(DNA Extraction) 2管 1.5mL/管
酶混合液(Enzymes MIX) 1管 40μL/管
阴性对照(NTC) 1管 50μL/管
TB阳性对照(TB-PTC) 1管 50μL/管

四、荧光PCR仪器适用范围：
ABI系列、MJ系列、Roche系列，博日系列及其他荧光定量PCR检测仪。

五、储存条件及有效期：
本试剂盒于-18℃以下保存，有效期为12个月。

六、样品采集、前处理与DNA提取
6.1 样品采集
6.1.1 适用标本类型：痰、支气管灌洗液、尿、粪、脑脊液或胸、腹水，其他肺外感染可取血、相应部位分泌液或组织细胞等。
6.1.2 标本采集
6.1.2.1 组织：取发病组织约1g，置入1.5mL洁净EP管，立即送检；
6.1.2.2 血液：无菌注射器抽取外周血1-2mL注入EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管；
6.1.2.3 液体标本：取0.5-1mL左右，置入1.5ml洁净EP管，立即送检；
6.2 样本前处理：
6.2.1 脑脊液和胸、腹水：13000rpm离心3min沉淀集菌，去上清；
6.2.2 痰、支气管灌洗液、尿、粪等污染标本：经4%NaOH(痰和碱的比例为1:4，尿、支气管灌洗液和碱的比例为1:1)处理15min；尿标本加5%鞣酸、5%乙酸各0.5mL于锥形量筒内静置，处理后吸去上清，沉淀直接用于提取结核杆菌DNA或者经酸中和后接种培养，然后再对培养物提取DNA。
6.3 DNA提取
6.3.1 对上述处理好的样本加入40uL核酸提取液，100℃恒温处理10min，13000rpm离心5min，取上清液转移至新的1.5mL EP管，-20℃保存；
6.3.2 DNA的提取也可以采用商业化DNA提取试剂盒。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取4µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(TB-qPCR MIX)、酶混合液(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合液 1µL N×1µL
总量 15µL N×15µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入21μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品/阴性对照(NTC)/阳性对照(TB-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入实时荧光PCR仪器的反应槽内。推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

八、结果分析
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(TB-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明结核杆菌核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明结核杆菌核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行结核杆菌real time PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明结核杆菌核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管应高压灭菌，而且必须不含DNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，并按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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规格：48次/盒|96次/盒
一、简介：
新城疫病毒实时荧光qRT-PCR检测试剂是按照美国农业部(USDA)的检测标准而制备的商业化检测试剂盒。本试剂盒为中的探针报告基团为6-FAM，淬灭基团为MGB。

二、用途：
本试剂盒适用于检测禽类喉咽棉拭子、泄殖腔棉拭子、各种组织样品、尿囊液及细胞培养液等。可用于新城疫毒株感染的辅助诊断、监测及流行病学调查，其检测结果仅供参考。

三、试剂盒组成：(50T/Kit)
组份 数量 规格
荧光qRT-PCR反应液(NDV-qRT-PCR MIX) 1管 700μL/管
酶混合物(Enzymes MIX) 1管 50μL/管
无核酸酶水(Nuclease-Free Water) 1管 500μL/管
阴性对照(NTC) 1 管 50μL/管
阳性对照(NDV-PTC) 1 管 50μL/管

四、储存条件及有效期
本试剂盒于-18℃以下保存，有效期为6个月。

五、荧光PCR仪器适用范围
ABI系列，Roche系列等荧光定量PCR检测仪等。

六、样品的采集与RNA提取
6.1 样品的采集
按照标准《新城疫诊断技术》(GB/T 16550-2008)和《新城疫检疫技术规范》(SN/T 0764-2011)进行样品的采集。
6.2 样品RNA提取
可按常规方法提取，也可采用商品化试剂盒提取病毒RNA。
（1） 取灭菌的1.5 mL Eppendorf离心管，做好标识。
（2） 每管加入600 µL裂解液，分别加入被检样本200 µL，再加入200 µL氯fǎng，混匀器上振荡混匀5 s，于4℃ 12000r 离心15 min。
（3） 取无RNA酶的1.5 mL Eppendorf离心管，加入-20℃预冷400µL异丙醇，吸取步骤(2)各管中的上清液转移至相应的管中，避免吸出中间层，颠倒混匀。
（4） 于4℃ 12000 r离心15min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体；加入600µL 75％预冷乙醇，洗涤。
（5） 于4℃ 12000 r离心10min，弃上清，倒置于吸水纸上，沾干液体。室温干燥5 min～10 min。
（6） 加入10µL无核酸降解酶的水，溶解管底的RNA，5000 r离心5 s，冰上保存备用。若需长期保存须放置-70℃冰箱。
 注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5µL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议zuì后在样品制备区域加入阳性对照。

七、检测步骤：
7.1 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光qRT-PCR反应液(NDV-qRT-PCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 19 µL N×19 µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 20 µL N×20 µL
计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入20μL，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(NDV -PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 real time RT-PCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
反转录(Reverse Transcription) 1循环 45℃ for 5 min
预变性 1循环 94℃ for 30 sec
PCR 扩增 40循环 94℃ for 5 sec
60℃ for 30 sec
在60℃ 延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。

八、结果分析：
8.1 结果分析条件设定
直接读取检测结果。基线和阈值设定原则根据仪器噪声情况进行调整，以阈值线刚好超过正常阴性样品扩增曲线的zuì高点为准。
8.2 试验成立判定
（1） 阴性对照(NTC)：不应产生任何的扩增曲线。
（2） 阳性对照(NDV-PTC)：均产生扩增曲线。
（3） 以上条件应同时满足 ，否则，此次试验视为无效。
8.3 结果判定
（1） 在试验成立的条件下，Ct值≤35的样本为阳性，表明NDV核酸阳性。
（2） Ct值显示为无的样本为阴性样本，表明NDV核酸阴性。
（3） 如果35＜Ct值≤40，判为可疑样品。对于可疑样品，先看扩增曲线。如果扩增曲线为对数扩增曲线，则为可疑阳性，否则判为阴性。
（4） 对于可疑阳性样品，重新抽提核酸，再次进行NDV qRT-PCR检测。如果重复扩增曲线为对数扩增曲线，判为样本阳性，表明NDV核酸阳性；否则判为样本阴性。

九、注意事项：
（1） 初次使用前请仔细阅读说明书。并严格按照说明书步骤操作。
（2） 所有使用的离心管zuì好高压灭菌，而且必须不含RNA酶。
（3） PCR操作应严格按照要求分区(试剂配制区、标本处理区、PCR扩增区等)，防止实验室污染。
（4） 样本提取、试剂配置、加样需在不同区的超净工作台进行，以免污染。
（5） 试剂盒里所有物品应视为污染物对待，按照卫生部《微生物生物医学实验室生物安全通则》进行处理。


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