CZ008 Strep-tag II蛋白纯化

北京百奥莱博供应的Strep-tag II蛋白纯化用于科学研究，Strep-tag II蛋白纯化是我司众多优质磁珠微球之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括Strep-tag II蛋白纯化磁珠在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：Strep-tag II蛋白纯化磁珠
英文名称：Strep-Tactin
产品货号：CZ008
产品规格：5ml/50ml/250ml

产品简介：
Strep-Tag系统是模拟链霉亲和素-生物素系统的蛋白纯化系统，Strep-Tactin 对Strep-Tag II的亲和能力与链霉亲和素相比，至少强10倍以上，且分离纯化条件温和，在生理条件下即可实现蛋白的分离纯化；此外，与其他tag相比，Strep-Tag II为8个氨基酸的小标签(WSHPQFEK)，由于标签小，仅为1 kDa左右，不影响融合后蛋白质的结构和功能。这些温和的纯化参数能保存蛋白质的生物活性，并仅经一步提取即可产出超过99%的纯度。Strep-Tactin 磁珠采用特殊的蛋白偶联工艺，将Strep-Tactin蛋白共价偶联到超顺磁性磁珠表面，制备了一种专为、快速分离纯化Strep-tag II蛋白的一种功能化材料，实现并搭建了提取速度、提取量及纯度兼得的蛋白纯化平台。
适用范围：
可用于从任何表达系统，包括杆状病毒、哺乳动物细胞、酵母和细菌中含有Strep-Tag II标签蛋白的分离纯化。
操作流程：
目标蛋白与磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。以下提供一个较为广泛应用的Strep-Tag II蛋白的纯化流程，用户可参考该操作流程，或者根据自己蛋白的特性自行设计和优化蛋白纯化流程。
1. 缓冲溶液配制
Binding/Washing Buffer：10 mM Tris-HCl,150 mM NaCl,1 mM EDTA,pH 8.0
Elution Buffer：2.5 mM desthiobiotin in Binding Buffer。
2. 样品处理
本说明书提供以下三种样品的处理方法：
(1) 大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量Binding Buffer稀释，加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)；冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，在冰上放置30 min，以降解核酸。另外，如果目标蛋白含量较低，建议将粗蛋白样品进行离心操作。
(2) 胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量Binding Buffer稀释平衡，即为粗蛋白样品。
(3) 动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，用适量PBS洗涤1次，弃上清；用适量含1%(v/v) Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重悬；加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)；置于冰上10 min，即为粗蛋白样品。
3. 磁珠预处理
一般情况下，磁珠的使用量是由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。例如：采用大肠杆菌表达某目标蛋白，250 mL发酵液收获1 g湿重的菌体，通过预实验估算其目标蛋白产量为～7 mg，用户需要取10 mL 10%的磁珠悬液用于目标蛋白的纯化。以下即以此为例进行详细说明：
(1) 将磁珠产品置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取10 mL磁珠悬液于离心管中；
(2) 将离心管置于磁性分离器上，待溶液变澄清后，移去上清液；
(3) 加入5～10 mL Binding Buffer/Washing Buffer到上述装有磁珠的离心管中，盖紧盖子，漩涡振荡15 s，使磁珠重新悬浮。将离心管置于磁性分离器上，磁性分离＊，移去上清液，重复洗涤2次。
(*注：在磁性分离过程中，为了减少磁珠在使用过程中的损耗，待溶液变澄清后，盖紧离心管盖子，保持离心管仍在磁性分离器上，手持磁性分离器与离心管上下翻转数次，使澄清的溶液涮洗离心管盖上残留的磁珠，静置片刻，使溶液重新变澄清；以下同。)
4.目标蛋白与磁珠结合
(1) 用10 mL Binding Buffer重悬1 g湿重的菌体，进行破碎和裂解后，即为粗蛋白样品；
(2) 将粗蛋白样品转移到装有已预处理磁珠的离心管中，盖紧离心管盖；
(3) 将离心管置于漩涡混匀器振荡15 s，然后将其置于垂直混合仪上，室温垂直混匀30 min(如果需要，可在2～8℃的低温环境下旋转混合约1 h，防止目标蛋白降解)；
(4) 将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离，移出上清液到新的离心管中以备后续检测。从磁性分离器上取下离心管进行下一步洗涤步骤。
5. 磁珠洗涤
(1) 将步骤4的磁珠中加入5～10 mL Washing Buffer，漩涡混合2 min，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测；
(2) 继续将上述磁珠中加入5～10 mL Washing Buffer，漩涡混合2 min，使磁珠重新悬浮，将磁珠悬液转移至新的离心管，避免原离心管壁上非特异性吸附蛋白污染目标蛋白；磁性分离，移出上清液到收集管，以备取样检测；
6.目标蛋白洗脱
(1) 加入2～5 mL Elution Buffer(用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度)于离心管中，盖紧离心管盖，然后将离心管置于垂直混合仪上，室温垂直混合洗脱10 min；磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品；
(2) 如果需要，可以重复上述步骤1次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否洗脱完全。
7. 磁珠再生和保存
(1) NaOH再生：洗脱目的蛋白后的磁珠按照以下顺序进行洗涤： 5～10 mL纯化水洗涤3次、5～10 mL 0.5M NaOH 洗涤3次、5～10 mL纯化水洗涤至中性，zuì后加入10 mL保存液，将磁珠放置2～8℃环境保存。
(2) HABA再生：用脱硫生物素洗脱目标蛋白的磁珠还可以用HABA缓冲液再生，加入5～10 mL 1mM HABA洗涤磁珠5次，接着用Binding Buffer洗涤磁珠至磁珠本身颜色，每次洗涤5 min，zuì后加入10 mL 保存液，将磁珠放置2～8℃环境保存。
蛋白纯化流程的优化：
以上操作流程适用于大部分Strep-Tag II标签蛋白的纯化，根据目标蛋白与Strep-Tactin蛋白纯化磁珠的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化，以提高目标蛋白的回收率和纯度。
1. 提高目标蛋白回收率的参考方法：
(1) 延长蛋白溶液与磁珠孵育的时间；
(2) 添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(3) 增加磁珠用量；
(4) 延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数；
2. 提高目标蛋白纯度的参考方法：
(1) 在纯化过程中添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(2) 延长洗涤的时间，增加洗涤次数；
注意事项：
(1) 次使用本产品前，请务必详细阅读本用户手册；
(2) 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；
(3) 在使用本产品前，请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态；
(4) 请选用质量好的移液器吸头和离心管，以免磁珠贴壁或混合过程发生渗漏引起磁珠的损耗；
(5) 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬；
(6) 用户可根据实际需要保留经磁性分离移去的上清液，进行取样检测，以便分析纯化过程和优化蛋白纯化流程；
(7) 本产品可以重复使用，重复使用时，建议纯化同种蛋白，纯化不同种类的蛋白时，建议使用新的磁珠，以防交叉污染；
(8) 本产品需与磁性分离器配套使用；
(9) 本产品仅供研究使用。

根据您的关注的Strep-tag II蛋白纯化磁珠，您可能还对以下产品有需求：



名称：镍离子螯和His-tag蛋白纯化磁珠
货号：CZ005
规格：5ml/2×50ml/4×250ml
产品简介：
组氨酸标签蛋白纯化磁珠具有超顺磁性，专为、快速纯化组氨酸标签蛋白而设计的一种功能化材料。可通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白，大地简化纯化工艺和提高纯化效率，适合科研和工业领域便捷地进行组氨酸标签蛋白纯化。
与传统层析方式使用的金属螯合琼脂糖预装柱相比，采用磁珠纯化组氨酸标签蛋白，无需对样品进行多次长时间的高速离心和滤膜过滤、无需控制流速、更无需高昂的层析设备。样品与磁珠的特异性结合、洗涤以及目标蛋白的洗脱变得简单、快速、易操作。对于熟练的操作者而言，在1 h内就能获得高纯度的目标蛋白，且能轻松实现高通量和大规模样品的平行处理，为研究者节省了时间和成本。
本产品系列包括镍离子(Nickel)、钴离子(Cobalt)两种金属离子螯合磁珠，它们在目标蛋白结合量和非特异性吸附等性能上有所区别，用户可根据目标蛋白与不同种类金属的结合性能，以及对目标蛋白的产量和纯度的要求，选择不同种类的金属离子螯合磁珠。具体产品信息及规格参考《产品特性》。
保质期 在2～8℃可稳定保存，保质期2年
注1：磁珠蛋白结合量与目标蛋白特性有关，此处仅做参考值
注2：1 mL 磁珠悬液中包含100 μL磁珠
注3：磁珠溶剂耐受性请参考附录信息
适用范围：
适用于纯化细菌、酵母、昆虫和哺乳动物细胞等分泌或胞内表达的可溶性组氨酸标签蛋白，也可用于变性蛋白的纯化(包涵体需变性后再进行纯化)。
操作流程：
1. 缓冲液的准备
目标蛋白与组氨酸标签蛋白纯化磁珠的结合性能将直接影响目标蛋白的纯化效率，而各种缓冲液配制也将在一定程度上影响目标蛋白的回收率和纯度。因此，在较大规模蛋白纯化之前，用户应该自行设计实验，筛选出适合纯化目标蛋白的缓冲液体系，主要包括Binding Buffer、Washing Buffer、Elution Buffer。
增加咪唑浓度进行洗脱是组氨酸标签纯化磁珠zuì常用的洗脱方法，次使用时，在不确定zuì佳的洗脱咪唑浓度情况下，推荐在缓冲液中分别加入10 mM、20 mM、50 mM、100 mM、200 mM、300 mM、400 mM、500 mM咪唑，浓度从低到高分别洗脱，磁吸后收集蛋白上清液，之后通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱结果。
以下提供的缓冲液体系适用于多数组氨酸标签蛋白的纯化，供用户参考。
Binding Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，5～50 mM Imidazole，pH7.4
Washing Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，50～100 mM Imidazole，pH7.4
Elution Buffer：20 mM Phosphate Buffer，500 mM NaCl，500 mM Imidazole，pH7.4
2. 样品处理
本说明书提供以下三种样品的处理方法：
(1)大肠杆菌、酵母等细胞内表达蛋白：表达细胞用适量的Binding Buffer稀释，加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)，重悬细胞，冰浴超声裂解细胞，即为粗蛋白样品。如果样品过于粘稠，可根据需要在粗样品中加入适量核酸酶，冰浴30 min，以降解核酸。另外，用户也可以根据实际需要对蛋白样品进行离心操作。
(2)胞外表达蛋白：取胞外表达上清，用等量Binding Buffer稀释，即为粗蛋白样品。
(3)动物细胞胞内表达蛋白：取适量动物细胞，先用适量PBS洗涤1次，弃上清；接着用适量含1%(v/v)Triton X-100或1%(v/v)NP-40的Binding Buffer重悬，加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)，冰浴10 min，即为粗蛋白样品。
3. 磁珠预处理
一般情况下，磁珠的使用量是由用户根据目标蛋白产量和磁珠载量信息计算获得。例如：采用大肠杆菌表达某目标蛋白，500 mL发酵液收获2 g湿重的菌体，通过预实验估算其目标蛋白产量为10～20 mg，用户需要取5 mL磁珠悬液用于目标蛋白的纯化。以下即以此为例进行详细说明：
(1)将磁珠产品置于漩涡混匀器上充分混匀，用移液器取5 mL磁珠悬液于15 mL离心管中，进行磁性分离*，弃上清液，从磁性分离器上取下离心管。
(2)加入5 mL Binding Buffer到上述装有磁珠的离心管中，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮；进行磁性分离，移去上清液。重复洗涤2次。
(注*：在磁性分离过程中，为了减少磁珠在使用过程中的损耗，待溶液变澄清后，盖紧离心管盖子，保持离心管仍在磁性分离器上，手持磁性分离器与离心管上下翻转数次，使澄清的溶液涮洗离心管盖上残留的磁珠，静置片刻，使溶液重新变澄清；以下同。)
4. 目标蛋白与磁珠结合
(1)用10 mL Binding Buffer悬浮2 g湿重的菌体，进行破碎和裂解之后，即为目标粗蛋白样品，加入到装有预处理磁珠的离心管中，将离心管置于漩涡混匀器振荡15 s。
(2)将离心管置于旋转混合仪上，室温旋转混合20～30 min(如果需要，可以在2～8℃ 的低温环境下，旋转混1 h，防止目标蛋白降解)。
(3)将离心管置于磁性分离器上进行磁性分离，移出上清液至新的离心管中以备后续检测，从磁性分离器上取下离心管进行后续洗涤步骤。
5. 磁珠洗涤
(1)加入10 mL Washing Buffer到装有磁珠的离心管中，轻轻翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，移出清洗液到新的离心管中，以备取样检测。重复此步骤1次。
(2)加入10 mL Washing Buffer到装有磁珠的离心管，使磁珠重新悬浮，将磁珠悬液转移到新的离心管(避免原离心管壁上非特异性吸附蛋白污染目标蛋白)，磁性分离，移出上清液到清洗液收集管。
6. 目标蛋白洗脱
(1)用户可根据需要改变洗脱体积调整目标蛋白浓度，加入2～10 mL Elution Buffer，轻轻翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，收集洗脱液到新的离心管中，即为纯化的目标蛋白样品。
(2)如果需要，可以重复上述步骤1次，收集样品到新的离心管中，以检测目标蛋白是否洗脱完全。
7. 磁珠后处理
(1)在装有磁珠的离心管中加入5 mL Elution Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，去除上清液。
(2)重复上述步骤2次。
(3)在离心管中加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠悬浮，磁性分离，去除上清液。
(4)重复上述步骤2次。
(5)加入Storage Buffer到磁珠中使总体积为5 mL，保存于2～30℃(长期保存，置于2～8℃)，可用于下一次同种蛋白的纯化。
8. 磁珠再生
磁珠连续使用三次以上，其结合目标蛋白的能力可能会明显降低，建议进行磁珠再生处理。
Stripping Buffer：20 mM Sodium Phosphate，500 mM NaCl，100 mM EDTA，pH 7.4
Beads Washing Buffer(可选)：0.5 M NaOH，2 M NaCl
Recharge Buffer：100 mM NiSO4/CoCl2(该化学试剂有一定的毒性，可能造成过敏反应，使用时务必注意)
Storage Buffer：20%(v/v)乙醇
以5 mL 10%(v/v)磁珠悬液为例，详细说明磁珠再生操作：
(1)将磁珠悬液进行磁性分离，去除上清液，从磁性分离器上取下离心管，在离心管中加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液。
(2)加入5 mL Stripping Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，室温旋转混合5 min，磁性分离，去除上清液。重复此步骤1次。
(3)加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液，重复此步骤2次。
(4)碱处理：加入5 mL Beads Washing Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，室温旋转混合5 min，磁性分离，去除上清液。加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液。重复 ddH2O洗涤步骤3～5次，至洗涤液呈中性为止。
(5)加入5 mL Recharge Buffer，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，室温旋转混合20 min，磁性分离，去除上清液。
(6)加入5 mL ddH2O，上下翻转离心管数次，使磁珠重新悬浮，磁性分离，去除上清液。重复此步骤4次以上，保证镍离子去除完全。
(7)加入Storage Buffer到磁珠中使总体积为5 mL，保存于2～30℃(长期保存，置于2～8℃)。
蛋白纯化流程的优化：
以上操作流程适用于大部分组氨酸标签蛋白的纯化，根据目标蛋白与金属离子螯合磁珠的结合性能不同，用户可以从以下几个方面对纯化流程进行优化，以提高目标蛋白的回收率和纯度。
提高目标蛋白回收率的参考方法：
(1)降低样品溶液和Binding Buffer中的Imidazole浓度；
(2)样品溶液和其它缓冲液中添加表面活性剂等物质；
(3)添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(4)增加磁珠用量；
(5)延长蛋白与磁珠孵育的时间；
(6)延长洗脱目标蛋白的时间或增加洗脱次数。
提高目标蛋白纯度的参考方法：
(1)提高样品溶液和Binding Buffer中Imidazole、NaCl的浓度；
(2)样品和缓冲液中添加表面活性剂等物质；
(3)添加合适的蛋白酶抑制剂，防止目标蛋白降解；
(4)延长洗涤的时间，增加洗涤次数；
(5)采用梯度Imidazole浓度洗脱目标蛋白。
注意事项：
1. 次使用本产品前，请务必详细阅读本说明书；
2. 磁珠使用和保存过程中应避免冷冻、干燥和高速离心等操作；
3. 在使用本产品前，请务必充分振荡使磁珠保持均匀的悬浮状态；
4. 请选用质量好的移液器吸头和离心管，以免磁珠贴壁或混合过程发生渗漏引起磁珠的损耗；
5. 磁珠与溶液混合过程中，如果溶液粘稠无法通过翻转离心管重悬磁珠，可采用移液器反复吹吸或短时漩涡混合使磁珠充分重悬；
6. 用户可根据实际需要保留经磁性分离移去的上清液，进行取样检测，以便分析纯化过程和优化蛋白纯化流程；
7. 本产品可以重复使用，当纯化性能降低时，建议进行再生处理；
8. 使用过的磁珠重复使用时，建议纯化同种蛋白，纯化不同种类的蛋白时，建议使用新的磁珠；
9. 本产品需与磁性分离器配套使用；
10. 本产品仅供研究使用。

关注Strep-tag II蛋白纯化磁珠，的同时，为您推荐更多您可能感兴趣的产品：

货号	名称	规格
CZ006	钴离子螯和His-tag蛋白纯化磁珠	5ml/2×50ml/4×250ml
CZ022	羟基磁珠(500nm,10mg/ml)	5ml/50ml
CZ023	羟基磁珠(1000nm,10mg/ml)	5ml/50ml
CZ024	羟基磁珠(1000nm,20mg/ml)	5ml/50ml
CZ025	羟基磁珠(30～150μm)	10ml/100ml/1000ml
CZ030	氨基磁珠(500nm)	5ml/50ml
CZ031	氨基磁珠(2μm,10mg/ml)	5ml/50ml

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