YT453 p53荧光素酶报告基因质粒

p53荧光素酶报告基因质粒是高品质的克隆与表达产品，由北京百奥莱博供应，本产品用于科学研究，p53荧光素酶报告基因质粒是我司众多优质克隆与表达之一，质量堪比同类进口产品，价格非常优惠，目前正热烈促销中，恭候您的咨询订购。...

特别提示：包括p53荧光素酶报告基因质粒(p53抑癌基因质粒)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：p53荧光素酶报告基因质粒(p53抑癌基因质粒)
英文名称：p53-luc Reporter gene plasmid
产品货号：YT453
产品规格：1μg

p53报告基因质粒是用于检测p53转录活性水平的报告基因质粒。p53质粒是以pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个p53结合位点，可以高灵敏度地检测p53的激活水平。

pGL6-TA质粒是用于在哺乳动物细胞中进行萤火虫萤光素酶报告基因检测的新一代质粒。该报告基因质粒比Promega公司的pGL3系列有了的改进，一方面对于luciferase的编码进行了改进，确保能更好地在哺乳动物细胞中进行表达，同时对整个质粒中所有可以被预测出的可能的转录因子结合位点全部进行了适当的突变处理，在保持原有功能不变的情况下，使各种转录因子在质粒上的非特异性结合降到zuì低。

p53质粒的主要信息如下：

base pairs	5659
p53 response element	20-73
Minimal TA promoter (pTA)	96-118
luc2 reporter gene	160-1812
SV40 late poly(A) signal	1847-2068
SV40 early enhancer/promoter	2116-2534
Synthetic neomycin phosphotransferase
(Neor) coding region	2559-3353
Synthetic poly(A) signal	3378-3426
Reporter Vector primer 4 (RVprimer4) binding region	3493-3512
ColE1-derived plasmid replication origin	3750
Synthetic Beta-lactamase (Ampr) coding region	4541-5401
Synthetic poly(A) signal/transcriptional pause site	5506-5659
Reporter Vector primer 3 (RVprimer3) binding region	5608-5627

p53质粒的图谱如下：



使用说明：
1. 次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. p53可以用常规的细胞转染方法转染细胞。检测时可采用萤火虫萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT271)或双萤光素酶报告基因检测试剂盒（YT273）。
3. 紫外照射、离子辐射等可以导致DNA损伤的作用或试剂可以激活p53，可以用作p53报告基因检测时的阳性对照。

储存条件：-20℃。

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产品特点：
1. 使用pUC19质粒检测，转化效率可达108，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
2. recA1和endA1突变阻止对克隆DNA的修饰或对宿主菌染色DNA的重组，提高纯化质粒的产量和质量。
3. JM109菌株基因型：endA1 recA1 gyrA96 thi hsdR17(rk-mk+)relA1 supE44 D(lac-proAB)[F’traD36 proAB laqlqZ Δ M15 ]
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：无菌超纯水，SOB和SOC液体培养基，相关抗菌素。

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA 总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。


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