HR0489-x MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒

MTS溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，MTS溶液很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。MTS法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。...

特点：

● 易于使用：直接将MTS溶液，加入到细胞中，孵育然后读取吸光度值。

● 快速：在96孔板中进行检测，不需洗涤或收获细胞。也不需要溶解步骤。因为MTS甲臢产物可溶解在组织培养基中。

● 非放射性：不需液闪混合液，不需处理放射性废物（不像[3H]-胸腺嘧啶）。

● 灵活：平板被读数后还可以放回温箱继续颜色反应（不像MTT）。

● 安全：不需要挥发性有机溶剂来溶解甲臢化合物（不像MTT）。

应用：

● 细胞增殖；细胞毒性；凋亡结果 ● 化学灵敏性 ● 细胞贴附确定；趋化性

样本类型：

● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞

试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：

● 带有450nm波长的酶标仪/分光光度计 ● CO₂培养箱 ● 离心机 ● 移液器 ● 96孔培养板

● PBS缓冲液 ● HBSS

使用注意事项：

● 需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。

● 用培养基或PBS来配制待检测药物。

● 如果待测药物有还原性，则测定不含细胞，仅含有MTS的待测药物溶液在490nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小,则可以直接加入MTS,如果吸光度相对较大,则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次,然后加入新的100μL培养基和10μL MTS进行检测。

● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

● 加MTS 溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，对于大多数情况孵育1 小时即可，白细胞需要培养较长时间。

● 如果不是使用96 孔板检测，MTS 溶液的用量相应等比例增加即可。

活性测定使用方法：

1、收集细胞，加细胞悬液100μL（约5000-10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充）。每板设对照（加100μL培养基）。

2、置37℃，5% CO₂孵育过夜，倒置显微镜下观察。

3、每孔加入10μL待检测药物溶液，37℃孵育。

【注】：

● 此处以药物处理细胞为例，实际以自己的细胞样品为准。

● 用各种方法制备的细胞模型按下面方法加入MTS试剂后检测即可。

4、每孔加入10μL MTS 溶液，37℃孵育1-4小时。

【注】：

● 此处以96孔板加样为例，实际检测时以自己的细胞培养容器为准。

● 按培养基的用量的10%比例添加MTS试剂即可。

5、测定490nm各孔的吸光值。

6、同时设置空白孔（培养基和MTS溶液，无细胞），对照孔（不加药培养基和MTS溶液，有细胞），每组设定3-5复孔。

【注】：

● 复孔数量根据自己实际需要设定，为了降低试剂消耗成本，可以少设复孔。

结果分析：

细胞活力计算：

将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。

细胞活力% =（加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD）×100

数量测定使用方法：

1、先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2、按比例(例如：1/2 比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加MTS试剂培养一定时间后测定OD值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)，OD值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量 (使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入MTS后的培养时间)。

常见问题：

● 检测时需要换液吗？

如果待测药物有还原性，需要换液，否则不需要。

● 如何判断待测药物是否含有还原性？

测定不含细胞，仅含有待测药物的溶液加入MTS反应后的在490nm处的空白吸光度。如果该吸光度很小，说明待测药物没有还原性或还原性很小，对MTS没有影响，则可以不换液，在培养基中直接加入MTS；如果吸光度相对较大，说明药物具有较强的还原性，则需要除去含药物的培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100μL培养基和10μL MTS进行检测。

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