HR8305 CFSE细胞增殖与毒性检测试剂盒
CFSE标记细胞呈绿色荧光,荧光波长:λex=496 nm,λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm,此时的发射波长为516nm,使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。CFSE 标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞增殖外,还可用荧光酶标板定量活细胞数目,或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。...
检测方法:
● 荧光显微镜 ● 流式细胞仪 ● 激光共聚焦
样本类型:
● 悬浮细胞 ● 贴壁细胞
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 流式细胞仪或荧光显微镜或激光共聚焦 ● 离心机 ● 移液器 ● PBS或者HBSS(不含酚红)
使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。
● CFSE母液极易水解,建议分装保存,分装后用封口膜密封管口,再用锡箔纸包裹,最后和干燥剂一起用塑料袋密封,≦-20℃冷冻保存。
● CFSE工作液现配现用,不能提前配制,因为CFSE 吸水会分解,影响染色效果。
● CFSE易被水解,在水溶液中会变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。
● CFSE溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内,可以37℃水浴片刻至全部融解后使用。
● CFSE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞,最佳标记时间需自行摸索。正式实验前,建议先做几个孔摸索染色浓度和加入CFSE试剂后的培养时间。
● 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
使用方法:
1、根据需要检测的细胞样品数,用CFSE探针稀释液将CFSE母液10倍稀释,再用HBSS缓冲液20-400倍稀释,配制成CFSE染色工作液,终浓度相当于将CFSE母液200-4000被稀释。不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱,可以适当提高CFSE的终浓度。如果背景太高,可以适当降低CFSE的终浓度,请摸索条件找到最佳浓度。
【注】:
● 也可不用提供的探针稀释液,直接用HBSS等缓冲液或相应无血清培养基稀释染料母液至所需浓度。
● 开始实验前,使用HBSS缓冲液或无血清培养基稀释CFSE到需要的工作浓度。工作浓度为根据不同细胞的预实验结果确定的最佳工作浓度,一般染色终浓度200-4000倍稀释。
● 一般起始浓度按500-1000倍稀释即可。
● 为了降低过度加载染料导致潜在背景和细胞毒性,在不影响实验结果前提下应尽可能低浓度染色。
● 工作液现配现用。
2、将待测细胞用染色工作液重悬,至细胞浓度大约107/ml。
3、在37℃培养箱中避光孵育15-30分钟。
4、离心后去上清,收集细胞,用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次,最后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。
5、取500μL细胞悬液,用流式细胞仪检测。
随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。可以在荧光显微镜下直接观察标记效果,也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖,或用于其它待定实验目的的细胞荧光示踪。标记的细胞也可以用于活体动物的移植,并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。
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