HR0386-x 蛋白浓缩试剂盒

本试剂盒浓缩后蛋白失去活性，适用于下游应用对蛋白活性没有要求的实验。如果下游需要活性蛋白，可以选用离心法蛋白浓缩试剂盒，离心法蛋白浓缩试剂盒浓浓缩的蛋白样品保持天然构象，蛋白回收率更高。...

试剂盒以外自备试剂和仪器：

● 离心机 ● 涡旋混匀器 ●  振荡器 ● 蛋白Loading Buffer ● 蛋白定量试剂盒 ● 无水乙醇

使用注意事项：

● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。

使用方法：

1、在900μL待提取液体样本中加入100μL试剂A，充分混匀。

【注】：

● 根据实际蛋白样品量等比例调整试剂A的用量。

2、冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。

【注】：

● 可以4℃静置过夜。

3、在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。

【注】：

● 使用离心机能达到的最高离心力。

4、小心移除上层清液丢掉，留沉淀。

【注】：

● 蛋白量较少时可能很难看到沉淀。

● 尽可能吸干，不要残留液体。

● 离心完立即吸取上清，不要长时间放置。

● 注意避免洗掉沉淀。

● 可以将离心管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。

5、将离心管开口倒置在吸水纸上干燥离心管。

6、加1mL无水乙醇至离心管中。

7、在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。吸除上清，留沉淀。

【注】：

● 尽可能吸干，不要残留液体。注意避免吸掉沉淀。

● 离心完立即吸取上清，不要放置。

● 可以将离心管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。

8、加入200μL试剂B到离心管中。

9、在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。吸除上清，留沉淀。

【注】：

● 尽可能吸干，不要残留液体。注意避免吸掉沉淀。

● 离心完立即吸取上清，不要放置。

● 可以将离心管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。

10、加入200μL试剂B到离心管中。

11、在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。吸除上清，留沉淀。

【注】：

● 尽可能吸干，不要残留液体。注意避免吸掉沉淀。

● 离心完立即吸取上清，不要放置。

● 可以将离心管倒扣在吸水纸上轻轻控几下，除去残余在管口的液体。

12、将离心管开口倒置在吸水纸上干燥离心管。

【注】：

● 或开盖敞口静置至液体完全干燥。

● 也可将离心管置于37℃烘箱10-20分钟烘干至管底无明显液体残留。

● 也可以改成室温静置或用电吹风吹干，除去管底和管壁残留液体即可。

13、沉淀中加入20-50μL 1×Loading buffer，煮10min，溶解蛋白，直接用于下游实验。或者用40-100μL试剂C溶解蛋白沉淀，充分混匀。

【注】：

● 根据下游实验的需要选择溶解液，不一定用试剂盒中的溶解液C。

● 试剂盒中的蛋白溶解液含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他溶解液。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理或透析处理。

● 部分蛋白样品通常难溶解，可以加热或者超声处理促溶。

14、在4℃，10000×g条件下离心10分钟。

15、收集上清用于下游实验。

【注】：

● 建议用BCA法进行蛋白定量。

● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题，注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

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